黄芪甲苷干预人膝骨关节炎退变关节软骨细胞的效应及机制研究

摘要

目的:研究黄芪中的有效组成黄芪甲苷对KOA退变关节内炎症因子IL-1β及TGF-β1、VEGF、Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因的mRNA表达影响。
　　方法:提取确诊为KOA临床KELLGREN&LAWRENCE分级标准Ⅲ-Ⅳ级患者，全膝置换术后的退变膝关节软骨，进行细胞培养，将培养的软骨细胞分离传代后，取第3代细胞，通过苏木素-伊红染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞比对，并进行VEGF、TGF-β1、Ⅱ型胶原、蛋白多糖免疫荧光染色，观察软骨细胞退变情况后，分为6组（A组:软骨细胞+DMEM对照组;B组:软骨细胞加入25mmol/LAS;C组:软骨细胞加入50mmol/LAS;D组:软骨细胞加入75mmol/LAS;E组:软骨细胞加入100mmol/LAS;F组:软骨细胞加入500mmol/LAS），取4h、8h、24h、48h、72h这5个时间点，采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组退变软骨内软骨细胞VEGF、TGF-β1、Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因的mRNA表达情况。
　　结果:在一定浓度、一定时间段内黄芪甲苷能提高软骨细胞TGF-β1、VEGF、Ⅱ型胶原、蛋白多糖基因mRNA的表达，减少软骨细胞炎症因子IL-1β的表达，达到保护软骨，延缓关节软骨退变的作用，通过各不同时段不同浓度退变软骨细胞的甲苯胺蓝染色及不同时段、不同浓度退变软骨细胞的TGF-β1、VEGF、Ⅱ型胶原、蛋白多糖免疫荧光染色发现，在一定浓度、一定时间段内黄芪甲苷下退变软骨细胞的增殖及老化的情况明显减缓，而当黄芪甲苷浓度太高时，则进一步加速了退变软骨细胞的老化。
　　结论:本论文中的一系列的实验证明，黄芪的主要组份黄芪甲苷能有效防治KOA，并对黄芪甲苷的作用机制提供了充分的理论依据，为临床推广使用提供了坚实的理论基础。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照

绪论

第一章 理论研究

第一节 膝骨关节炎的中医临床理论

第二节 骨关节炎发病过程中软骨细胞的死亡机制研究概述

1 细胞死亡的类型

2 骨关节炎中的软骨细胞死亡

3 骨关节炎中软骨细胞程序性死亡信号的转导途径

4 关节软骨细胞凋亡相关基因表达

5 自噬性死亡凋亡信号的转导途径

6 关节软骨细胞自噬性死亡相关基因表达

第三节 黄芪在治疗KOA中的概述

1 黄芪在临床治疗KOA中的运用概况

2 黄芪在治疗KOA中的基础研究

3 小结

第四节 “芪藤汤”及黄芪有效组分黄芪甲苷治疗KOA中的概述

第二章 实验研究

实验一 人膝骨关节炎退变软骨细胞的培养与鉴定

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

实验二 黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨内炎症因子白细胞介素1β mRNA表达的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

实验三 黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨内Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

实验四 黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨内转化生长因子β1和血管内皮生长因子mRNA表达的影响

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

4 小结

第三章 全文研究总结

参考文献

攻读博士学位期间取得的研究成果

致谢

作者简介

附录

综述 黄芪在骨伤科的应用