姜黄素抑制脂多糖诱导的人绒毛外滋养细胞miR-155表达及细胞凋亡

摘要

目的：
　　人绒毛外滋养细胞(HTR-8/SVneo)过度凋亡是滋养细胞侵入能力下降的重要因素，是引起子痫前期的原因之一。既往研究发现，PE发病中Tall Like Receptor4(TLR4)炎症通路激活起重要作用。本实验考察姜黄素对于脂多糖(LPS)诱导的人绒毛外滋养细胞过度凋亡的干预作用及其机制。
　　方法：
　　体外培养人绒毛外滋养细胞（HTR-8/SVneo细胞株），分为姜黄素干预组(12.5，25，50μmol/L)、阳性对照组(LPS组、重组腺病毒Ad-miR-155组)、阴性对照组。采用real-timePCR检测不同组别细胞内的miR-155基因表达量;报告基因检测NF-κB信号通路活性;Transwell检测绒毛外滋养细胞侵袭能力;ELISA定量检测不同组别的细胞凋亡情况以及用BCA试剂盒蛋白定量，Western blotting法分析不同组别细胞内的NF-κB(p65)蛋白表达情况。
　　结果：
　　1、real-time PCR结果显示LPS处理可上调细胞内miR-155的表达;NF-κB报告基因和Western blotting结果显示，LPS激活了绒毛外滋养细胞中NF-kB炎症通路。
　　2、ELISA细胞凋亡检测和Transwell侵袭试验证明，LPS通过miR-155诱导绒毛外滋养细胞凋亡过度，导致其侵袭力下降。
　　3、Western blotting和其q-PCR结果显示，不同剂量的姜黄素预处理组(12.5，25，50mol/L)均可降低细胞内NF-κB(p65)蛋白含量，当姜黄素浓度为12.5μmol/L时降低作用最显著;NF-κB报告基因结果提示姜黄素可抑制NF-κB的活性，并呈剂量依赖性。细胞凋亡检测结果表明与对照组相比，LPS处理可诱导细胞凋亡，而姜黄素(12.5，25，50μmol/L)预处理后可不同程度地抑制细胞凋亡;细胞侵袭试验提示姜黄素(12.5，25，50μmol/L)预处理后可不同程度地抑制人绒毛外滋养细胞迁移能力下降。
　　结论：
　　LPS通过miR-155促进滋养细胞凋亡，姜黄素预处理可以通过抑制TLR4通路激活，使NF-κB(p65)蛋白下调，下调LPS诱导的miR-155表达水平，从而抑制滋养细胞过度凋亡和侵袭能力下降。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1．中医学对子痫前期的研究认识

1．1 子痫前期的中医范畴

1．2 子痫前期的病因病机研究

1．3 中医药治疗子痫前期的研究进展

2．西医对子痫前期的认识

2．1 子痫前期的定义和流行病学

2．2 子痫前期的病因及发病机理研究进展

2．3 西医治疗子痫前期的研究进展

第二部分 实验研究

第一章 脂多糖诱导人绒毛外滋养细胞miR-155表达上调

1．1 前言

1．2 实验材料

1．3 实验方法

1．4 统计学分析

1．5 实验结果

1．6 讨论

1．7 小结

第二章 脂多糖LPS通过miR-155促进HTR-8／SVneo细胞凋亡

2．1 前言

2．2 实验材料

2．3 实验方法

2．4 统计分析

2．5 实验结果

2．6 讨论

2．7 小结

第三章 姜黄素抑制LPS介导的滋养细胞miR-1 55表达和细胞凋亡

3．1 前言

3．2 实验材料

3．3 实验方法

3．4 实验结果

3．5 讨论

3．6 小结

结论

参考文献

致谢