汉防己甲素防治放射性肺纤维化的实验研究

摘要

目的:本研究试图在成功建立大鼠放射性肺纤维化模型的前提下，运用病理学、分子生物学等检查技术观察大鼠放射性肺纤维化的肺组织中病理组织学及细胞因子的变化，并探讨汉防己甲素对放射性肺纤维化的防治效果及可能的作用机理。为临床上防治放射性肺纤维化拓展新的治疗手段和理论思路。
　　方法:选择140只雄性成年SD大鼠，随机分为4组:空白对照组（N组:20只）、模型组（R组:40只）、照射+地塞米松组（R+D组:40只）、照射+汉防己甲素组（R+T组:40只）;采用医用电子直线加速器6MV-X对大鼠进行照射，R、R+D、R+T组大鼠照射全胸单次剂量15Gy，N组大鼠照射0Gy。R+D组给予地塞米松悬浊液1 mg/kg-1·d-1灌胃，R+T组给予汉防己甲素悬浊液30 mg/kg-1·d-1灌胃，N和R组分别予以等容积的0.5％纤维素钠溶液灌胃;4组均于照射开始前1周给药，直到照射后4周截止。观察大鼠的一般情况，包括精神、活动、饮食、体重等变化。分别于照射后第4w、8w、12w每组处死6只大鼠，并记录不同组别大鼠体重、死亡及肺系数评分;取左肺组织分别进行HE染色和Masson染色观察大鼠肺组织的炎症及纤维化情况，并经免疫组织化学染色，应用Image ProPlus4.5软件测定TGF-β1、α-SMA的表达水平。
　　结果:1.体重变化:在照射前预防性给药1周中，N、R、R+T组体重无明显差异(P＞0.05)，而R+D组体重明显下降，与N、R、R+T组比较有统计学差异(P＜0.05)。在照射后随着时间的推移，4组大鼠体重皆呈增长趋势;在照射后三个时间点，R+T组与N组比较，体重无统计学差异(P＞0.05);R组、R+D组与N组比较，体重均下降，差异有统计学差异(P＜0.05)。
　　2.肺系数变化:与N组对比，R、R+D、R+T组肺系数均增加(P＜0.05);与R组对比，R+D组、R+T组肺系数均下降（P＜0.05）;在照射后第8w、12w，R+T组肺系数低于R+D组(P＜0.05)。
　　3.肺组织病理学表现:N组大鼠肺组织呈淡粉色，肺泡壁纤薄、光滑，轮廓正常;R组大鼠肺组织肿胀、出血，表面凹凸不平，有瘀斑及灰白结节，肺泡壁中重度增厚，腔隙缩小，早期有大片炎性细胞趋附，中后期可见大量增殖的成纤维细胞;R+D组、R+T组炎症表现及纤维化较轻。
　　4.TGF-β1、α-SMA表达水平:N组中TGF-β1、α-SMA在不同时间点呈阴性或弱阳性;R组中TGF-β1、α-SMA上调最为显著(P＜0.05);与R组相比，R+D组、R+T组中TGF-β1、α-SMA的水平下降，差异有统计学意义（P＜0.05）;在照射后第8w、12w，R+T组中TGF-β1、α-SMA水平低于R+D组，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:1.汉防己甲素对放射性肺纤维化有一定的防治作用，且中后期的疗效可能优于糖皮质激素，为放射性肺纤维化的临床治疗提供了依据;
　　2.抑制TGF-β1表达和成纤维化细胞的增殖及分化可能是汉防己甲素防治放射性肺纤维化的分子机制之一;
　　3.汉防己甲素是否可作为放射性肺纤维化的预防用药尚待进一步的临床研究。

目录

封面

声明

摘要

英文摘要

前言

1．材料

1．1 实验动物

1．2 主要药物

1．3 实验试剂与耗材

1．4 主要仪器与设备

2．方法

2．1 动物分组及给药方式

2．2 动物模型建立

2．3 组织标本采集

2．4 苏木素—伊红(HE)染色方法

2．5 Masson染色方法

2．6 免疫组织化学染色

2．7 观察指标

2．8 免疫组织化学染色结果判定方法

2．9 统计学方法

3．结果

3．1 一般情况

3．1．1 外观观察

3．1．2 体重变化

3．1．3 死亡情况

3．2 肺系数的变化

3．3 组织病理学表现

3．3．1 肺大体组织

3．3．2 HE染色表现

3．3．3 Masson染色表现

3．3．4 TGF-β1免疫组化表现

3．3．5 α-SMA免疫组化表现

4．讨论

4．1 动物模型的评价

4．2 阳性对照药物的选择

4．3 Tet对大鼠各项指标的影响

4．3．1 Tet对体重的影响分析

4．3．2 Tet对肺系数的影响分析

4．3．3 Tet对肺组织中TGF-β1、α-SMA的影响分析

4．4 Tet对RPF的可能作用机制

结论

参考文献

附录

文献综述

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢