姜黄素干预类风湿关节炎患者破骨细胞生成中NF-κB信号通路的机制研究

摘要

目的:观察姜黄素(Curcumin，Cur)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)患者破骨细胞生成的影响，探索核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)信号通路在此过程中的调节机制，为姜黄素应用于RA骨破坏的防治提供理论依据。
　　方法:(1)分离RA患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)诱导培养为破骨细胞，在培养过程中给予不同浓度姜黄素进行干预;(2)分组:Control组、Cur2.5μM组、Cur5μM组、Cur10μM组，姜黄素的浓度分别为0、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L;(3)诱导培养14天后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP)染色标记成熟破骨细胞，并行细胞计数;(4) Western Blot检测各组细胞中IκBα、p-IκBα蛋白的表达;(5) Western Blot检测细胞浆和细胞核中NF-κB p65的表达;(6)细胞免疫荧光染色法观察NF-κB p65核易位。
　　结果:(1)培养14天后，各组细胞均符合破骨细胞的形态学特征;(2) TRAP染色结果显示，与Control组相比，Cur2.5μM组、Cur5μM组和Cur10μM组TRAP阳性细胞数均明显减少，差异具有统计学意义(P＜0.05);(3) Western Blot结果显示，与Control组相比，Cur2.5μM组、Cur5μM组和Cur10μM组IκBα的蛋白表达水平明显升高，p-IκBα的表达水平明显下降，差异具有统计学意义(P＜0.05);(4)与Control组相比，Cur2.5μM组、Cur5μM组和Cur10μM组细胞浆中NF-κB p65的表达水平明显升高，而细胞核中NF-κB p65的表达水平明显下降，差异具有统计学意义(P＜0.05);(5)细胞免疫荧光染色结果显示，在未刺激状态下NF-κB p65主要分布于细胞浆中;经RANKL刺激后，NF-κB p65在细胞浆的表达减少，在细胞核的表达增加;经5μM姜黄素干预后，与RANKL刺激后相比，NF-κB p65在细胞浆的表达增加，在细胞核的表达减少。
　　结论:姜黄素通过抑制IκBα的磷酸化和IκBα的降解，减少了NF-κB p65的核易位，从而抑制NF-κB活化，进而达到抑制RA患者破骨细胞生成的作用。

目录

声明

摘要

前言

第一部分 理论研究

1 中医学对类风湿关节炎骨破坏的认识

1．1 病名沿革

1．2 病因病机

1．3 治则治法

2 中药姜黄用于治疗类风湿关节炎的理论依据

2．1 瘀血与痹证的关系

2．2 姜黄与五痹汤治痹探源

3 西医学对类风湿关节炎骨破坏的认识

3．1 破骨细胞与类风湿关节炎骨破坏

3．2 类风湿关节炎骨破坏防治策略

第二部分 实验研究

引言

1 材料

1．1 RA患者临床资料

1．2 主要实验仪器

1．3 主要实验试剂

1．4 实验试剂的配制

2 方法

2．1 RA患者PBMCs的分离与培养

2．2 TRAP染色标记破骨细胞并计数

2．3 Western Blot检测各组细胞中IκBα、p-IκBα的表达

2．4 Western Blot检测细胞浆和细胞核中NF-κB p65的表达

2．5 细胞免疫荧光染色检测NF-κB p6S核易位

2．6 统计学方法

3 结果

3．1 细胞形态学观察

3．2 姜黄素对RA患者破骨细胞生成数量的影响

3．3 姜黄素对RA患者破骨细胞IκBα、p-IκBα的表达的影响

3．4 姜黄素对RA患者破骨细胞细胞浆和细胞核中NF-κB p65表达的影响

3．4 姜黄素对RA患者破骨细胞细胞浆和细胞核中NF-κB p65表达的影响

3．5 姜黄素对RA患者破骨细胞NF-κB p65核易位的影响

4 讨论

结论

参考文献

附录一 综述 破骨细胞在类风湿关节炎骨侵蚀中的研究进展

附录

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢