四神丸对伊立替康所致的小鼠迟发性腹泻防治作用的实验研究

摘要

目的：迟发性腹泻为伊立替康(Irinotecan，CPT-11)主要剂量限制性毒性，严重影响患者的生活质量，甚至导致治疗中断，影响患者的疗效。目前依然缺乏较满意的防治方法。在本项研究中，建立小鼠CPT-11所致迟发性腹泻模型，研究四神丸各剂量组对CPT-11引起的迟发性腹泻的防治作用，并探讨其可能的机制。
　　方法：⑴迟发性腹泻模型的建立。50只健康雄性ICR小鼠被随机分为5组:腹泻模型组、四神丸低（0.6g·kg-1）、中(1.2g·kg-1)、高（2.4g·kg-1）剂量组、正常对照组，每组10只。腹泻模型组及四神丸各剂量组均尾静脉注射CPT-11（35mg·kg-1·d-1），每日1次，连续4日;正常对照组小鼠尾静脉被注射同等体积生理盐水。四神丸各剂量组于造模前一天灌胃给药，每日1次，连续7日，腹泻模型组及正常对照组小鼠被给予同等体积双蒸水灌胃。⑵每日观察、记录小鼠迟发性腹泻发生的情况、饮食及精神活动状态等。⑶样本采集小鼠末次灌胃给药24h后，腹腔注射水合氯醛麻醉，腹主动脉取血;断颈后处死，取结肠组织及盲肠内容物。⑷样本的检测。通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血样中的白介素1β(Interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的含量；比色法检测盲肠内容物β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase，β-G)的表达水平；盲肠内容物大肠杆菌培养，计数菌落数；结肠组织被固定、切片、HE染色后，于显微镜下观察结肠粘膜的结构和形态。
　　结果：①小鼠尾静脉注射CPT-11后，于24h后出现迟发性腹泻，腹泻模型组小鼠发生迟发性腹泻率为100％，其中重度腹泻发生率为80％;四神丸中、高剂量组重度腹泻发生率分别为40％;与腹泻模型组比较:四神丸中、高剂量组腹泻程度明显减轻(P=0.021，P=0.019)。②腹泻模型组小鼠5-6级粘膜损伤发生率为70％，而四神丸中、高剂量组均为30％，与腹泻模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。③四神丸中高剂量组血清IL-1β分别为:（72.61±10.15）/g·L-1，（71.86±8.78）/g·L-1较腹泻模型组（116.57±17.16）/g·L-1的水平显著降低(P＜0.01)。④四神丸中高剂量组血清TNF-α分别为:（71.50±3.39）/g·L-1，（69.43±6.23）/g·L-1较腹泻模型组（109.50±4.21）/g·L-1的水平显著降低(P＜0.01)。⑤四神丸中、高剂量组肠道β-G分别为:（1.109±0.055）U，（1.100±0.063）U;较腹泻模型组（1.438±0.022）U的表达显著降低(P＜0.01)。⑥四神丸低中高剂量组分别为（29.5±2.2）×1013/g，（30.4±3.5）×1013/g，(31.4±2.7)×1013/g;腹泻模型组（31.4±3.2）×1013/g;正常对照组（31.2±2.9）×1013/g。各组之间比较，菌落数无明显差异(P＞0.05)。
　　结论：四神丸对CPT-11所致小鼠迟发性腹泻有一定的预防和减缓作用，其机制可能与减少肠道β-G的含量，并降低血清中IL-1β、TNF-α的水平，从而减轻CPT-11对肠道黏膜的损伤有关。

目录

声明

摘要

第一部分 理论研究

1 西医学对迟发性腹泻的认识

1．1 迟发性腹泻的概念

1．2 伊立替康的代谢及诱导迟发性腹泻的可能机制

1．3 伊立替康迟发性腹泻的治疗现状

2 中医学对迟发性腹泻的认识

2．1 病因病机

2．2 治疗原则及方药

3 四神丸的来源及功效

4 四神丸在肠道疾病中的临床运用

4．1 慢性溃疡性结肠炎

4．2 克罗思病

4．3 腹泻型肠易激综合征

4．4 伊立替康所致的迟发性腹泻

4．5 中医难治性“五更泻”

5 四神丸对肠道疾病的实验研究

5．1 对腹泻模型的影响

5．2 溃疡性结肠炎模型的研究

5．3 对溃疡性结肠炎模型免疫调节

5．4 对结肠炎性病变后诱发结肠癌化学预防作用

5．5 对相关信号通路及蛋白的影响

第二部分 实验研究

1 材料

1．1 实验动物

1．2 药物及试剂

1．3 实验仪器

2 实验方法

2．1 实验分组、给药

2．2 迟发性腹泻模型的制备

2．3 给药的剂量及方法

2．4 取材

2．5 观察指标和方法

2．6 统计学方法

3 结果

3．1 四神丸对CPT-11所致迟发性腹泻的影响

3．2 四神丸对小鼠结肠粘膜损伤情况的影响

3．3 四神丸对小鼠血清中IL-1β的影响

3．4 四神丸对小鼠血清中TNF-α的影响

3．5 四神丸对小鼠盲肠内容物中β-G的影响

3．6 四神丸对盲肠大肠杆菌的影响

4 讨论

实验总结

参考文献

附录

综述 伊立替康的迟发性腹泻与其代谢酶关系的研究进展

攻读硕士学位期间取得的学术成果

致谢