1.诺丽汁、刺梨汁体外抗肿瘤研究;2.氧化修饰低密度脂蛋白致动脉粥样硬化研究

摘要

癌症是新世纪人类的第一杀手，但大多数抗肿瘤药物，由于缺乏理想的选择性，在杀伤肿瘤细胞的同时，往往会引起各脏器不同程度的损伤。中草药疗法在癌症的治疗上，杀死癌细胞的同时，不会影响到人体正常的细胞与脏器，并且还可起到扶正固本的作用。刺梨、诺丽是两种纯天然的植物，动物实验和临床上都证实具有抗肿瘤作用，本实验以人卵巢癌COC<,2>细胞和人急性单核白血病∪937细胞为研究对象，观察刺梨汁(ROSa roxburghii tratt fruit juice，RRTJ)、诺丽汁(Morinda citrifolia fruit juice，NoniJ)体外对肿瘤细胞增殖的影响，探讨其抑制肿瘤细胞增殖的作用机制。 刺梨汁、诺丽汁、及刺梨汁联合诺丽汁分别作用卵巢癌COC<,2>细胞。应用细胞计数测定细胞生长情况，流式细胞术分析细胞周期变化，Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡情况，并通过测定人单个核细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)活性分析对细胞的毒性作用，探讨刺梨汁、诺丽汁及刺梨汁联合诺丽汁对COC<,2>细胞体外增殖的抑制作用。结果发现，刺梨汁显著抑制COC2细胞的增殖，并呈现出剂量依赖性。经王Hoechst 33258染色，细胞核呈现荧光强度高的亮蓝色团块状，提示为早期凋亡细胞。诺丽汁与刺梨汁联用后，上述作用显著增强。人单个核细胞培养上清液中LDH活性无显著增加，提示两种果汁对细胞均无毒性。以上结果表明刺梨汁可抑制人卵巢癌细胞COC<,2>细胞增殖，并诱导其凋亡，诺丽汁和刺梨汁协同作用效果更加显著。 上述实验显示刺梨汁通过诱导肿瘤细胞凋亡明显抑制人卵巢癌细胞COC<,2>细胞增殖。我们进一步观察刺梨汁对人急性单核白血病∪937细胞生长、增殖的影响，探讨刺梨汁对其它肿瘤细胞是否同样起抑制作用以及促肿瘤细胞凋亡的可能机制。将不同浓度的刺梨汁与∪937细胞共同培养，应用光学显微镜观察细胞形态变化，细胞计数测定细胞生长情况，流式细胞术分析细胞生长周期的变化，RT-PCR观察凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化，硝酸还原酶法测定细胞一氧化氮(nitrogen monoxidum，NO)分泌量。结果发现，刺梨汁显著抑制∪937细胞增殖，并呈现出剂量依赖性，而对正常人单个核细胞生长无明显抑制作用。随着刺梨汁浓度的增加，U937细胞凋亡率增高，bax mRNA表达量上升，而bcl-2mRNA表达水平明显下降。U937细胞NO释放量也与刺梨汁浓度呈正相关性。以上结果表明刺梨汁可能通过影响细胞生长周期、降低bcl-2／bax比值，同时诱导细胞NO的分泌，促进U937细胞凋亡。 第二部分：氧化修饰低密度脂蛋白致动脉粥样硬化研究 氧化修饰脂蛋白在动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)发生、发展中起着重要作用。低密度脂蛋白(1ow-density lipoprotein，LDL)氧化修饰后，具有一定的免疫原性，在体内引发免疫应答反应，使肌体产生抗氧化LDL(oxidized low densitylipoprotein，Ox-LDL)自身抗体，并与之结合，形成LDL免疫复合物(LDL immunecomplex，LDL-IC)。已发现冠心病患者血清中LDL-IC水平显著增高，高LDL-Ic水平已成为As发生的预测指标。国外对LDL-IC进行了较深入的研究，但国内尚未有相关报道。本实验旨在通过探讨LDL-IC对小鼠腹腔巨噬细胞胆固醇酯的蓄积和NO释放的影响，进一步阐明LDL-IC致As作用和可能的机制。 系列密度梯度超速离心从新鲜人血浆分离天然LDL，与抗LDL抗血清IgG组分制备LDL-IC。LDL-IC与小鼠腹腔巨噬细胞孵育后采用酶荧光法检测细胞胆固醇酯(ch01ester01 esters，CE)含量，进行细胞形态学观察和组织化学分析，并用硝酸还原酶法测定细胞释放至培养液中的NO量。结果发现，LDL-IC剂量依赖性地诱导巨噬细胞内CE的大量堆积，其效果显著强于Ox-LDL(P<0.01)，经LDL-IC处理的巨噬细胞呈典型泡沫细胞状，与猩红强染色，而天然LDL、抗LDL-IgG处理的巨噬细胞内未见CE蓄积。此外，LDL-IC剂量依赖性地抑制巨噬细胞NO的分泌。结果提示，LDL-IC不仅通过导致小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化，也通过损伤细胞产生NO的功能参与致As作用。 LDL氧化修饰后，可通过形成LDL-IC等途径，导致细胞内胆固醇酯的蓄积和泡沫细胞的形成，参与As的病理过程。因此，选择有效、无毒的天然抗氧化物质，成为防治As的热点。金线莲是一种多年生草本植物，含有丰富的维生素C和多糖，可清除体内超氧负离子，具有抗氧化和保肝功效。本实验通过分析金线莲对LDL氧化易感性和脂质过氧化程度的影响，探讨金线莲的抗LDL氧化能力，为As的防治提供新的途径和药物。在体外用Cu<'2+>介导LDL氧化，加入各种剂量金线莲乙醇提取液，测定LDL氧化过程中产生的共轭双烯含量、硫代巴比妥酸反应物(TBARS)含量、观察LDL电泳迁移率的变化。结果显示，随着金线莲浓度的增加，LDL的氧化延滞时间逐渐延长。金线莲呈剂量依赖性降低LDL的TBARS值，同时，显著减慢LDL的电泳迁移率。结果提示，金线莲可有效减小LDL的氧化易感性，降低LDL的脂质过氧化程度，具有一定的抗脂质氧化功能。

目录

文摘

英文文摘

学位论文独创性声明及学位论文使用授权声明

第一章研究背景综述

第二章实验部分第一节诺丽汁、刺梨汁体外抗肿瘤实验

第二章实验部分第二节氧化修饰低密度脂蛋白致动脉粥样硬化研究

创新与特点

硕士期间论文发表情况

致谢