B淋巴细胞刺激因子（BLyS）与实验性重症肌无力动物模型的相关性研究

摘要

本文通过建立实验性自身免疫性重症肌无力动物(experimental autoimmunemvasthenia gravis，EAMG)模型，利用抗BLyS抗体在EAMG模型建立前的预防和建立后的治疗试验，检测了抗BLyS抗体在 EAMG中的预防和治疗作用，并初步探索了抗BLyS抗体在 EAMG中的作用机理。结果如下： 1实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型的建立与鉴定 用烟碱型乙酰胆碱受体al亚单位125～149多肽片段和鼠伤搴沙门氏裸菌免疫C57BL／6小鼠，观察小鼠的临床症状、抗体滴度、游泳疲劳时间及肌电图变化。结果表明：大部分模型组小鼠强化接种后出现轻微肌无力症状，级别评定为1分；模型组小鼠的抗体滴度与正常对照组小鼠差异显著，20只模型组小鼠中有12只的抗体滴度为阳性；游泳试验中有18只小鼠呈阳性；肌电图检查中所有小鼠均为阳性，最大衰减幅度达82％。提示：成功建立了EAMG模型，为进一步研究EAMG的发病机理打下了基础。 2抗BLyS和BSA多克隆抗体的制备和纯化 选取2-3 kg，的雄性日本大耳白兔，分别采用胭淋巴结免疫法和皮下免疫法免疫兔子，制备抗血清；间接ELISA法检测抗血清的效价：并应用分级饱和硫酸铵盐析法进行纯化。结果表明：获得抗BLyS多克隆抗体，间接ELISA法检测抗血清的效价为50万倍；获得抗BSA多克隆抗体，间接ELISA法检测抗血清的效价为5万倍。提示：分别成功制备了抗BLyS和抗BSA多克隆抗体，为进一步研究抗BLyS和重症肌无力动物模型之间的相关性奠定了基础。 3抗BLyS抗体对EAMG的预防和治疗作用研究 建立实验性自身免疫性重症肌无力动物预防组、预防对照组、治疗组和治疗对照组，比较四组小鼠的临床症状、抗体滴度、游泳疲劳时间及肌电图变化。结果表明：预防组小鼠的临床症状评为0分，抗体滴度80％为阴性，游泳疲劳时间为阴性，肌电图衰减均为阴性，与正常组小鼠之间的差异不显著；治疗组临床症状评为1分，抗体滴度60％为阳性，40％为可疑阳性，游泳疲劳时间为阳性，肌电图衰减均为阳性，与正常组小鼠之间的差异显著；预防对照组和治疗对照组小鼠的临床症状评为1分，游泳疲劳时间和肌电图衰减均为阳性，抗体滴度分别为60％和80％阳性，与正常组小鼠之间的差异显著。提示：抗BLyS多克隆抗体对实验性自身免疫性重症肌无力的预防有较好的效果，而对其治疗效果不明显。 4抗BLyS抗体在EAMG中作用机理的初步研究 ELISA双抗体夹心法检测正常对照组、EAMG模型组、预防组、预防对照组、治疗组、治疗对照组小鼠血清中BLyS的含量；分别用MTT法和碱性磷酸酶法检测EAMG小鼠脾脏T、B淋巴细胞在AChR(A组)、AChR和抗BLVS多抗(B组)、AChR和抗BSA多抗(C组)和ConA或LPS(阳性对照组)刺激下增殖情况。结果表明：模型组小鼠血清中BLyS含量高于正常对照组，差异显著，预防组低于模型组，接近正常对照组，与正常对照组无差异性，其他三组均高于正常对照组，差异显著；T淋巴细胞体外增殖实验中，A、B、C组和阳性对照组均高于对照组，差异极其显著，B组低于阳性对照组，与其比较差异显著，A、C两组与阳性对照组无差异性；B淋巴细胞体外增殖实验中，各组之间差异均不明显。提示：小鼠血清中BLyS的含量超出正常范围与EAMG的发生有一定的相关性；抗BLyS多抗能够下调体外T淋巴细胞对免疫抗原的致敏性；抗BLyS多抗对体外B淋巴细胞的作用不明显。

目录

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摘要

前言

第一部分文献综述第一章重症肌无力的研究进展

第一部分文献综述第二章B淋巴细胞刺激因子及相关疾病

第二部分实验研究第三章实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)动物模型的建立与鉴定

第二部分实验研究第四章抗BLyS和BSA多克隆抗体的制备和纯化

第二部分实验研究 第五章抗BLyS抗体对EAMG的预防和治疗作用研究

第二部分实验研究 第六章抗BLyS抗体在EAMG中作用机理的初步研究

全文结论

致谢

附攻读硕士期间发表的论文