（一）hsTRAIL蛋白的表达与复性研究;（二）重组枯草芽胞杆菌谷氨酰胺合成酶的诱导表达与培养基优化

摘要

为了获得有活性的hsTRAIL蛋白，本实验对hsTRAIL包含体进行了复性的研究。通过对hsTRAIL包涵体洗涤条件的研究，使蛋白纯度提高到90％以上，并确定了其简单适宜的复性方法，纯度达98％。采用稀释法可使得近65％的蛋白恢复可溶性，而透析法也能获得33％的可溶性蛋白。本实验中，我们对稀释复性的 hsTRAIL蛋白进行了生物学活性的测定。结果显示：复性后的hsTRAIL蛋白能诱导Hela细胞凋亡，而对正常的人胚肾细胞293细胞无影响，实验结果与国外文献报道的结果相一致，表明复性后的hsTRAIL蛋白具有良好的生物学活性。 以重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶．(L-谷氨酸：氨连接酶，Glutamine Synthetase，GS EC 6.3.1.2)蛋白表达宿主菌株BL21(DE3)(pET3C/谷氨酰胺合成酶)作为研究对象，借助SDS PAGE分析方法，对于用乳糖诱导由T71ac启动子控制的重组目的产物蛋白的各种基本参数进行了初步的研究。研究了最佳诱导起始生长量、最适诱导物浓度、诱导持续时间、补加乳糖和氨苄青霉素＼最佳本底培养基、最佳碳源及其最佳添加比例、碳源与诱导物的最适组合，并探索了适用于改良型培养基的诱导参数。实验结果表明，对于重组目的产物蛋白，改良型M9培养基完全可以替代LB培养基；以甘油为碳源，可以避免葡萄糖对T71ac启动子的屏蔽作用。以乳糖为诱导物，目的蛋白的表达量、可溶性及酶活与以IPTG为诱导物基本接近。研究结果为酶法合成谷氨酰胺的工业化生产提供了一定的参考。

目录

声明

第一部分hsTRAIL蛋白的表达与复性研究

摘要

前言

1 TRAIL的结构和分布

2 TRAIL受体

3 TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的机制

4 TRAIL在肿瘤治疗方面的价值

5 TRAIL作用的毒性反应

6展望

实验研究

前言

1实验材料

2实验方法

3实验结果

4讨论

5参考文献

第二部分重组枯草芽胞杆菌谷氨酰胺合成酶的诱导表达与培养基优化

摘要

前言

一谷氨酰胺

二谷氨酰胺合成酶

参考文献

实验研究

第一章乳糖诱导重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶基因在大肠杆菌中的表达

第二章重组枯草芽孢杆菌谷氨酰胺合成酶蛋白在改良M9培养基中的诱导表达

致谢