斑马鱼zTWEAK和暗纹东方鲀gTRAIL的克隆表达、进化分析、生物学功能研究

摘要

本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一部分 斑马鱼肿瘤坏死因子弱诱导凋亡因子TWEAK(简称zTWEAK)基因的克隆、表达、组织分布以及生物信息学分析。
　　TWEAK是肿瘤坏死因子配体超家族成员，是一个多功能的细胞因子。为研究不同物种之间此基因进化关系，本文运用反转录PCR的方法克隆了斑马鱼的TWEAK的cDNA，其中开放阅读框由711个碱基对组成，编码236个氨基酸。通过比对斑马鱼的TWEAK基因序列，显示zTWEAK基因与hTWEAK(人 TWEAK)基因序列的同源性是31.4％，与鼠TWEAK序列的同源性是30.8％，进化树分析还表明斑马鱼与河鲀鱼的同源性是48.0％，而与绿河鲀的同源性是59.5％，与哺乳动物的同源性从29.6％到32％之间。克隆zTWEAK基因，并将其与SUMO基因融合后于大肠杆菌BL21中表达，融合蛋白大小是33KD，通过Ni-NTA纯化，并经SDS-PAGE和western检测，成功表达并纯化融合蛋白，为斑马鱼作为模式动物提供了有用的信息。
　　第二部分 暗纹东方鲍TRAIL基因的克隆、表达、组织分布及生物学功能的研究。
　　用反转录PCR方法克隆暗纹东方纯的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(简称gTRAIL)的全长cDNA，其开放阅读框包含870碱基对，编码的蛋白质序列与其他的鱼类具有高度的同源性。将TRAIL与SUMO基因融合表达是为增强其在大肠杆菌BL21中的可溶性，体外MTT检测表明TRAIL融合蛋白剂量依赖性的诱导Jurkat和Hela细胞的凋亡。

目录

文摘

英文文摘

引言

第一部分 文献综述

第1章 TWEAK的研究进展

1.1 TWEAK的分子结构和表达特征

1.2 TWEAK受体的表达分布及结构

1.3 TWEAK诱导的信号转导

1.4 TWEAK的生物学功能

第2章 TRAIL的研究进展

2.1 TRAIL及其受体的的分子结构

2.2 TRAIL诱导的凋亡信号转导

2.3 TRAIL在治疗肿瘤方面的价值

第3章 斑马鱼、暗纹东方鲀的研究现状和进展

3.1 斑马鱼作为模式动物在免疫学研究中的重要作用

3.2 暗纹东方纯作为模式动物在免疫学研究中的重要作用

第二部分 实 验 部 分

第4章 斑马鱼TWEAK基因克隆表达、组织分布及生物信息学分析

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 实验结果与分析

4.4 讨论

第5章 暗纹东方鲀TRAIL基因克隆表达、组织分布及生物学功能研究

5.1 实验材料

5.2 实验方法

5.3 实验结果与分析

5.4 讨论

总结

参考文献

附录：硕士在读期间研究成果

致谢