肝细胞生长因子HGF诱导肝癌细胞HepG2离散与浸润机制的实验研究

摘要

肿瘤细胞转移是肝癌病人治疗失败和死亡的主要原因。对肝癌治疗来说，防止癌的复发（或再发）与转移是其主要目标。肝细胞生长因子HGF是一种多功能的生长因子，与其受体c-Met结合可介导细胞的生长、迁移和形态建成等多项细胞学效应，大量研究表明HGF/c-Met信号异常与肿瘤的浸润和转移密切相关。 我们在体外检测HGF对肝癌细胞生长影响时，发现HGF明显促进肝癌细胞HepG2的离散和浸润。本文通过下调c-Met的表达考察了抑制HGF/c-Met信号通路对HGF诱导的HepG2离散、浸润的影响，并且考察了HGF刺激HepG2对两种与肿瘤浸润转移密切相关的粘附分子β-catenin、E-cadherin的影响，试图探求HGF诱导肝癌细胞HepG2离散与浸润的机制，以期找到新靶点来抑制HGF诱导的HepG2离散与浸润。结果如下: 1、通过对细胞克隆扩散程度的定量分析发现用HGF刺激HepG248 h后，HepG2的离散程度增加了2-3倍，Transwell小室法体外模拟浸润实验表明当HGF浓度为50-100 ng/ml时，HepG2在体外浸润能力增强了2-3倍。利用腺病毒介导的RNA干扰技术下调c-Met的表达可抑制HGF诱导的HepG2离散与浸润，具有潜在的用于治疗肝癌浸润与转移的价值。 2、用免疫印迹方法分析发现，在HGF刺激HepG224h和48h后，E-cadherin的表达量下降，实时定量PCR检测显示，在HGF刺激HepG224 h和48 h后，E-cadherin的mRNA水平没有发生明显的变化，这提示E-cadherin发生了降解。免疫细胞荧光染色显示，HGF刺激HepG230 min后，β-catenin发生入核，并且通过免疫共沉淀发现此时β-catenin与E-cadherin结合减少;HGF刺激HepG248h后，通过荧光素酶报告基因发现β-catenin的转录调节活性显著增强，而腺病毒Ad△TCF-4可抑制HGF诱导的HepG2细胞离散;当HGF刺激HepG212 h和24h后，利用实时定量PCR检测到β-catenin靶基因MMP-7转录的增强，这种转录的增强可被Ad△TCF-4所抑制。免疫印迹分析还显示腺病毒Ad△TCF-4可抑制HGF诱导的E-cadherin的降解。这些结果提示HGF刺激HepG2，使β-catenin入核，提高TCF/LEF的转录活性，进而增强MMP-7的转录，可能使E-cadherin发生降解。HGF诱导HepG2离散与β-catenin入核，并提高TCF/LEF的转录活性有关。腺病毒Ad△TCF-4可抑制HGF诱导的HepG2离散，这为抑制HGF诱导HepG2离散提供一新靶点。

目录

声明

摘要

第一章 综述

一、肝细胞生长因子HGF及其受体c-Met的结构和功能

二、HGF／c-Met信号通路与肿瘤侵袭转移的关系

三、HGF／c-Met信号通路在肿瘤侵袭转移中作用机制的研究进展

四、HGF／c-Met信号通路与抗肿瘤侵袭转移治疗

五、小结

参考文献

第二章 HGF促进肝癌细胞HepG2离散与浸润

材料与方法

结果与分析

本章讨论

参考文献

第三章 β-catenin介导的Wnt信号通路的激活参与HGF诱导HepG2离散

材料与方法

结果与分析

本章讨论

参考文献

全文小结

附录 主要仪器设备

致谢