不同培养条件对嘎拉苹果愈伤组织遗传变异的影响研究

摘要

本实验对嘎拉(Gala)苹果单芽系组培苗的获得，叶片愈伤组织的诱导、继代以及愈伤组织在分子水平上的遗传变异进行了系统的研究，主要研究结果如下：　　1.以室内水培萌发的芽为外植体，最佳消毒方法是0.1﹪HgCl2+吐温(2滴)消毒7min；防止褐化以培养基中添加4g·L-1PVP，芽接种后暗培养10d并结合3d更换一次培养基效果好；最佳诱导、增殖培养基是MS+BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1，继代、扩繁培养基是MS+BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1；继代周期以28-30d为宜。　　2.以嘎拉苹果单芽系组培苗叶片为外植体诱导愈伤组织，最佳培养基为MS+蔗糖30g·L-1+2，4-D2.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1+BA2.0mg·L-1，诱导率可达93.7﹪。在愈伤组织诱导过程中，2，4-D起着主导作用。愈伤组织的产生首先需要黑暗条件的启动，其增殖与生长分化则需在光下进行；接种后直接进行光照处理，抑制愈伤组织形成。愈伤组织继代周期以15-30d为宜。 3.在SSR扩增过程中，对反应体系中的模板DNA浓度、MgCl2浓度、TaqDNA聚合酶浓度、dNTP浓度及引物浓度5个因子设立正交试验，建立了SSR扩增反应体系：25μL反应体系中，10×Buffer2.5μL，MgCl2(25mM)4μL；dNTP(2.5mM)4μL；primer(10μM)1μL；DNA35ng；TaqDNApolymerase1U。　　从26对SSR引物中筛选出多态性最佳的CH02D12(F：AACCAGATTTGCTTGCCATC，R：GCTGGTGGTAAACGTGGTG)用于变异的检测。　　利用SSR-PCR扩增对不同培养条件下的愈伤组织进行了遗传变异的鉴定。结果表明，在愈伤组织的培养过程中，变异是普遍存在的。不同物质对愈伤组织变异的影响由大到小依次为：蔗糖＞2，4-D＞NAA=BA，愈伤组织变异频率最小的水平分别为：蔗糖30g·L-1，2，4-D0.05mg·L-1，NAA0.5mg·L-1，BA2.0mg·L-1，愈伤组织变异频率最大的水平分别为：蔗糖10g·L-1，2，4-D2.0mg·L-1，NAA0.1mg·L-1，BA4.0mg·L-1。随着继代数的增加，愈伤组织在分子水平上的变异有增加的趋势。

目录

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引言

第一章文献综述

1植物组织培养研究进展

1.1植物组织培养技术的产生与发展

1.2植物组织培养的应用

1.3苹果组织培养研究进展

1.4愈伤组织培养的研究

2体细胞无性系变异研究现状

2.1体细胞无性系变异机制

2.2体细胞无性系变异的来源及影响因素

2.3体细胞无性系变异的检测

3 SSR分子标记技术及其应用

3.1 SSR的发现及命名

3.2微卫星形成机理及类型

3.3微卫星DNA的功能

3.4微卫星DNA位点多态性的分析

3.5 SSR技术的应用

3.6 SSR技术在果树上的应用进展

第二章嘎拉苹果单芽系组培苗的获得

摘要

前言

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1外植体不同消毒处理的效果

2.2不同防褐化处理的效果

2.3激素浓度配比对快繁的影响

2.4继代周期对芽增殖和生长的影响

3讨论

第三章嘎拉苹果叶片愈伤组织的诱导

摘要

前言

1材料与方法

1.1材料及试验条件

1.2方法

2结果与分析

2.1蔗糖及不同生长调节剂配比的诱导效果

2.2不同暗培养天数的诱导效果

2.3不同继代天数对愈伤组织的影响效果

3讨论

第四章嘎拉苹果愈伤组织遗传变异的检测

摘要

前言

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1愈伤组织DNA提取及检测结果

2.2 SSR引物的筛选结果

2.3 SSR-PCR反应体系的获得

2.4愈伤组织遗传变异鉴定的结果

3讨论

参考文献

致谢