我国叶螨体内感染的Wolbachia的wsp基因序列测定与系统发育分析

摘要

叶螨科害螨分布范围广，寄主植物多，是农业生产上的重要害螨。随着农药的大量使用，其抗性问题甚至比其它农作物害虫更为严重。本文通过PCR扩增对我国叶螨科主要害螨Wolbachia的感染情况进行了检测，同时测定了Wolbachia的wsp基因序列，最后根据Wolbachia的wsp基因序列，建立了我国叶螨体内感染的Wolbachia与国外叶螨体内感染的Wolbachia的系统发育树，研究分析了它们之间的进化关系。 一、实验材料的采集与饲养　　二、用PCR技术监测我国发生的主要叶螨的Wolbachia感染情况。结果说明Wolbachia的感染在各地理种群间和各地理种群内的分布是不同的。 三、测定Wolbachia的wsp基因序列，并对各不同地理种群之间进行比较。结果发现不同地理种群间的Wolbachia的wsp基因序列是不同的，但差异并不大，片段长度都为596bp左右。 四、基于wsp基因序列，对我国叶螨与国外叶螨体内感染的Wolbachia进行系统发育分析　　采用距离法在Kimura-2Parameter模型下建立NJ树，从而对它们进行系统发育分析，得出它们中大部分都与B大组的Ori组的许多株Wolbachia十分相近或完全相同。分析表明我国叶螨与国外叶螨体内所感染的Wolbachia的亲缘关系不一定很远，而且同源性可能较高。 五、我国朱砂叶螨和二斑叶螨与国外红色型和绿色型二斑叶螨体内感染的Wolbachia的系统发育分析　　基于Wolbachia的wsp基因序列，分别构建了三个系统发育树。最后得出我国二斑叶螨体内感染的Wolbachia与国外绿色型二斑叶螨体内感染的Wolbachia亲缘关系很近，同分为一个支系；而我国朱砂叶螨体内感染的Wolbachia与国外红色型二斑叶螨体内感染的Wolbachia亲缘关系较远，不在同一个支系。同时还可以看出二斑叶螨的大部分地理种群感染的Wolbachia与朱砂叶螨全部地理种群感染的Wolbachia在亲缘关系上有明显的分化，分别属于不同的支系。　　通过这些研究，可以确定我国叶螨体内感染的Wolbachia的进化位置，为进一步揭示Wolbachia是否对我国叶螨生殖产生影响以及是如何影响的奠定了基础，为将来在生物防治上利用Wolbachia作一些理论性探索。

目录

文摘

英文文摘

原创性声明及学位论文版权使用授权书

第一章文献综述

1.Wolbachia的形态学与在体内的分布

2.Wolbachia的多样性和系统分化

3.Wolbachia的水平传播

4.Wolbachia对宿主生殖活动的调控

4.1胞质不亲和(cytoplasmic incompatibility,CI)

4.2诱导孤雌生殖(parthenogenesis inducing,PI)

4.3雌性化(feminization)

4.4杀雄(male-killing)

5.Wolbachia的检测技术

6.Wolbachia的应用前景

6.1 Wolbachia与物种形成

6.2 Wolbachia诱导的CI在生物防治上的应用

6.3 Wolbachia诱导的PI在生物防治上的应用

7.叶螨的经济意义

7.1朱砂叶螨

7.2二斑叶螨

7.3叶螨科其它叶螨的经济意义

第二章二斑叶螨Wolbachia的wsp基因扩增和序列测定

摘要

引言

1材料与方法

1.1供试材料

1.2二斑叶螨总DNA的提取

1.3 PCR扩增体系和条件

1.4扩增产物的电泳检测

1.5 PCR产物纯化

1.6质粒载体的连接反应和转化

1.7质粒的提取

1.8测序

1.9序列分析

2结果与分析

2.1二斑叶螨Wolbachia的感染情况

2.2二斑叶螨体内Wolbachia的wsp基因序列

2.3二斑叶螨体内Wolbachia的wsp基因序列比较与同源性分析

3讨论

第三章朱砂叶螨Wolbachia的wsp基因扩增和序列测定

摘要

引言

1材料与方法

2结果

2.1朱砂叶螨Wolbachia的感染情况

2.2朱砂叶螨体内Wolbachia的wsp基因序列

2.3朱砂叶螨体内Wolbachia的wsp基因序列比较与同源性分析

3讨论

第四章叶螨科其它叶螨体内Wolbachia的检测

摘要

引言

1材料与方法

2结果

3讨论

第五章从Wolbachia角度分析朱砂叶螨和二斑叶螨两者间的系统发育关系

摘要

引言

1材料与方法

2结果

3讨论

全文总结

参考文献

致谢

附录Ⅰ：攻读硕士学位期间发表的学术论文