鸡柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫程序、交叉免疫及稳定性研究

摘要

鸡球虫病的免疫预防研究越来越受到人们的重视。寻找免疫原性好的保护性抗原，是完成基因工程苗和核酸疫苗研究的前提。实践证明，激发宿主细胞免疫反应来防治鸡球虫病是更有效的途径之一。DNA疫苗的一个显著优势是刺激机体产生广泛的细胞免疫反应和持久的免疫记忆，尤其是联合应用一些细胞因子，构建调节型DNA疫苗，更有诱人的应用前景。国内外关于DNA疫苗免疫程序的研究，还很少有人涉及，一个好的免疫程序对生产实践具有不可低估的应用价值。本研究对鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)免疫调节型DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2、pVAX1-pEtK2-IL-2进行免疫程序筛选，在此基础上再进行交叉免疫与稳定性试验。主要包括以下几个方面： 1 鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫剂量的研究 鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)免疫调节型DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2设计了200μg、100μg、50μg、25μg四个剂量组，pVAX1-pEtK2-IL-2设计了100μg、80μg、50μg、25μg四个剂量组，均经胸部肌肉二周龄首免，三周龄加强免疫接种，第四周龄攻鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊5× 10<'4>个／羽。第五周龄剖杀所有试验鸡，观察增重、盲肠病变记分、克盲肠内容物卵囊数和抗球虫指数。结果表明，重组质粒pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2剂量50μg免疫保护效果最为明显，ACI可达189.90；重组质粒pVAX1-pEtK2-IL-2剂量80μg免疫时ACI可达184.87。说明pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-250μg和pVAX1-pEtK2-IL-2 80μg每羽的免疫组具有较高的抗球虫指数，免疫效果优于其它剂量组。 2 鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫途径的研究 DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pErK2-IL-2以剂量50μg／羽、pVAX1-pEtK2-IL-2以剂量80μg／羽经胸部肌肉注射、颈部皮下注射、翼下静脉注射、口服、滴鼻滴眼五种途径二周龄首免三周龄加强免疫。鸡只处理、攻虫量、观察项目及抗球虫指数计算与上述免疫剂量研究试验相同。实验结果表明，两种DNA疫苗均以胸部肌肉注射免疫保护效果明显，抗球虫指数(ACI)均达180以上。 3 鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫次数和首免日龄筛选试验 鸡E.tenella DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2、pVAX1-pEtK2-IL-2分别设计一周龄首免不加强免疫、一周龄首免二周龄加强免疫、二周龄首免不加强免疫、二周龄首免三周龄加强免疫四个试验组。pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2以剂量50ug／羽、pVAXI-pEtK2-IL-2以剂量80μg/羽经胸部肌肉注射，筛选这两种DNA疫苗首免日龄和免疫次数。鸡只处理、攻虫量、观察项目及抗球虫指数计算与上述免疫剂量研究试验相同。实验表明，两种DNA疫苗均以二周龄首免三周龄加强免疫试验组与其它试验组相比，均有较好的免疫保护作用。4 鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗pEtK2-IL-2交叉免疫保护性试验 为研究鸡E.tenella DNA疫苗pcDNA4.0(c)-pEtK2-IL-2与pVAXl-pEtK2-IL-2对E.maxima、E.acervulina、E.necatrix感染的交叉保护性免疫，pcDNA4.0(c)-pErK2-IL-2以50gg与pVAXl-pEtK2-IL-2以80μg剂量分别经胸部肌肉二周龄首免三周龄加强注射免疫。鸡只处理、攻虫量、观察项目及抗球虫指数计算与上述免疫剂量研究试验相同。结果发现，这两种DNA疫苗对异种球虫具有部分免疫保护作用。5 鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗pEtK2-IL-2稳定性试验 为研究DNA疫苗对外界条件的稳定性，即不同温度不同保存时间对核酸免疫免疫效力的影响，鸡E.tenellaDNA疫苗pcDNA4.0(c),pEtK2-IL-2与pVAXl-pEtK2-IL-2分别于-20℃、4℃、室温保存，且每一温度又分别保存1、3和6个月。两种DNA疫苗免疫程序、免疫剂量、鸡只处理、攻虫量、观察项目及抗球虫指数计算与上述免疫剂量研究试验相同。实验发现，重组核酸疫苗在以上三个不同温度和不同保存时间内是稳定的，抗球虫指数(ACI)均达180左右，相互之间无显著差异。

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文献综述 第一章鸡抗球虫感染的免疫机制

文献综述 第二章DNA疫苗的研究进展

文献综述 第三章疫苗交叉免疫保护研究进展

实验研究 第四章鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫剂量的研究

实验研究 第五章鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫途径的研究

实验研究 第六章鸡E.tenella DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫次数与首免日龄的筛选

实验研究 第七章鸡E.tenella免疫调节型DNA疫苗pEtK2-IL-2交叉保护性研究

实验研究 第八章鸡E.tenella免疫调节型DNA疫苗pEtK2-IL-2稳定性试验

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