鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系的初步研究

摘要

细胞色素P450是一组含铁血红素同功酶超家族，参与众多临床药物的代谢。P450的知识是药物开发和临床使用的基本知识，美国FDA要求新药申报时提供有关对P450影响的资料(包括参与代谢的P450酶和对P450亚型的诱导、抑制作用等)。目前有关食品动物CYP450酶系报道很少，尚未见有关于鲫鱼肝脏药物代谢酶的研究报道。本课题对鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系进行了初步研究，以期为鱼类P450的进一步深入研究和指导水产药物的临床合理应用提供理论基础。 1 鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法学研究 为建立鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系含量与活性测定方法，取10尾鲫鱼，应用差速离心法提取鲫鱼肝微粒体，Lowry法测定肝微粒体蛋白浓度，紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素P450酶系含量与活性。结果显示鲫鱼肝微粒体蛋白含量为5.238±0.97mg／g肝重，细胞色素P450含量为0.319±0.032 nmol／mg蛋白，NADPH-细胞色素C还原酶活性为2.145±0.181 nmol／min／mg蛋白，氨基比林N-脱基酶活性为1.775±0.084 nmol／min／mg蛋白，红霉素N-脱甲基酶活性为0.906±0.073nmol／min／mg蛋白，苯胺羟化酶活性为0.063+0.007 nmol／min／mg蛋白。提示本文建立的鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系的检测方法灵敏可靠，重复性较好。 2 几种药物对鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系的影响 在肝微粒体水平上，研究了苯巴比妥、地塞米松、恩诺沙星及沙拉沙星等几种药物对鲫鱼细胞色素P450酶系的影响。苯巴比妥按40mg／kg体重、地塞米松按2mg／kg体重给鲫鱼腹腔注射，1次／d×4d；恩诺沙星和沙拉沙星均以100mg／kg体重剂量口灌给药，1次／d×5d，各组于末次给药后24h杀鱼取肝作进一步试验。结果表明：经苯巴比妥处理的鲫鱼微粒体蛋白浓度、细胞色素P450含量以及NADPH-Cyt C还原酶、氨基比林-N-脱甲基酶、红霉素-N-脱甲基酶和苯胺羟化酶等4种酶的活性和对照组比较均无显著差异(P>0.05)；地塞米松处理组的CYP450含量和ERND活性稍有增加，但所有各项检测指标与对照组相比差异亦无统计学意义(P>0.05)；和对照组比较，恩诺沙星和沙拉沙星组CYP450含量显著降低(P<0.05)，4种酶的活性极显著下降(P<0.01)。提示苯巴比妥和地塞米松对鲫鱼CYP450酶系无影响，而恩诺沙星和沙拉沙星则对鲫鱼肝药酶具有广泛的抑制作用，水产临床使用这两种药物时应考虑到它们对P450酶的抑制作用。 用以氯唑沙宗为底物探针的药动学方法研究氟苯尼考和乙醇对鲫鱼细胞色素P450 2El活性的影响，为临床合理用药提供参考。将鲫鱼随机分为3组，即对照组、氟苯尼考组和乙醇组。实验组鲫鱼分别每日经口给予氟苯尼考100Mg/kg·bw和乙醇1g/Kg·bw，连续5天后，与对照组鲫鱼同时一次性腹腔注射氯唑沙宗10mg/kg·bw，用高效液相色谱法分别测定氯唑沙宗在三组鲫鱼体内代谢过程中不同时间点的血药浓度，并计算药动学参数。结果表明：氯唑沙宗在三组鲫鱼体内代谢的药时曲线均符合二室模型，与对照组相比，氟苯尼考组和乙醇组氯唑沙宗的半衰期分别增加了5倍和0.9倍(P＜0.01)，药时曲线下面积分别增加了3.3倍和O.8倍(P＜0.01)，总清除率分别减少了83.8％和51.2％(P＜0.01)。提示氟苯尼考和乙醇对鲫鱼CYP2E1的活性具有显著的抑制作用。其它药物与氟苯尼考或乙醇合用时，其有效性和安全性可能会受到影响。

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文摘

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引言

第一章文献综述

第二章鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系检测方法学研究

第三章几种药物对鲫鱼肝微粒体细胞色素P450酶系的影响

第四章探针药物动力学评价氟苯尼考和乙醇对鲫鱼CYP2E1活性的影响

全文结论

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文