脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对猪脂肪沉积的调控及相关机理研究

摘要

本研究利用猪脂肪组织细胞膜蛋白制备卵黄抗体，并通过不同的试验对其免疫学活性、稳定性、生物安全性以及生物学效应进行了评估，旨在探讨脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对猪脂肪沉积的影响并通过在体、离体两方面，从整体、组织、细胞以及分子水平上探讨脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体影响脂肪沉积的可能机制。 1 脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对猪脂肪沉积的影响1.1脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体的制备及稳定性结果表明：蛋鸡四免后，经ELISA检测，卵黄抗体效价达1∶12 800以上；卵黄抗体与机体非脂肪组织的交叉反应较弱；冻干法对抗体效价影响小；抗体具有良好的热稳定性；室温下抗体保存300 d效价仍达1∶12 800。提示：用猪脂肪细胞膜蛋白免疫蛋鸡可制备高效价的特异抗体，其冻干粉仍保持较高效价、热稳定性好、耐贮存，便于生产上应用。 1.2脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体的生物安全性通过大鼠、猪的慢性毒性试验初步评估脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体的生物安全性。试验结果表明：大鼠75 d慢性毒性试验中未见明显中毒症状和死亡发生，体重、一般临床检查、饲料利用率等指标无异常；生长育肥猪104 d后除了发现实验组公猪脾脏指数较高外，一般临床检查、饲料利用率、生化、脏器病理组织学等指标均无异常，未发现该抗体有明显的毒性作用。提示：脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体粉无明显的毒副作用。 1.3对生长育肥猪生长性能和脂肪沉积的影响本试验以脂肪沉积能力较强的杜×(长·梅)三元杂交商品猪为实验动物，探讨脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对不同日龄猪的生长性能和胴体品质的影响。试验结果表明：在猪的生长前期添加75mg·kg<'-1>脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体粉后，实验组平均日增重、饲料报酬分别提高13.03％(P<0.01)和7.9％；瘦肉率提高10.3％(P<0.01)；实验组背膘厚、肾周脂肪指数、肠系膜脂肪指数和皮下脂肪指数分别下降24.14％(P<0.01)、27.54％(P<0.05)、20.42％(P<0.01)和28.28％(P<0.01)： 饲料中添加脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体粉可改善肉色，而肌肉pH<,45>值、大理石纹和肌内脂肪含量组问差异均不显著。在猪生长后期进行同样处理，发现实验组猪6～7肋背膘厚、肾周脂指数、肠系膜脂指数、皮下脂肪指数皆有明显的下降趋势，但差异不显著。结果提示：在育肥猪早期日粮中添加脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体可促进猪生长，提高胴体瘦肉率，降低脂肪比率，改善肉质性状。 2 脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体影晌猪脂肪沉积的机制研究2.1对猪脂肪代谢相关激素和酶活性的影响猪的日粮中添加75 mg·kg<'-1>脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体粉，104 d后，血清FFA浓度明显升高(P<0.01)，血清葡萄糖和甘油三酯浓度无明显差异；实验组血清insulin浓度降低30.81％(P<0.05)，leptin浓度下降30.74％(P<0.05)；不同部位脂肪细胞的直径显著降低；脂肪组织ME活性变化不显著；脂肪组织LPL活性以及脂肪组织与肌肉组织LPL活性的比值显著下降(P<0.05)。提示：脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体可以影响脂肪细胞的脂肪合成；血清insulin、leptin以及组织LPL活性的改变可能参与这种作用的调节。 2.2对猪脂肪组织凋亡相关基因表达的影响试验结果表明，实验组猪的皮下、肾周、肠系膜脂肪组织DNA含量分别比对照组下降38.42％(P<0.01)、39.92％(P<0.05)和39.16％，而DNA浓度差异不显著；实验组脂肪组织Bcl-xl mRNA相对丰度比对照组下降18.13％(P<0.05)；实验组脂肪组织BaX-α mRNA相对丰度比对照组提高13.79％(P<0.05)。提示：日粮中添加脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体使Bax-α与Bcl-xl基因表达失去平衡，可能诱导猪的脂肪细胞凋亡，上调的Bax-α和下调的Bcl-xl mRNA表达说明脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体是通过线粒体途径诱导脂肪细胞凋亡。 2.3对脂肪细胞增殖及其凋亡的影响结果表明，用不同浓度(0.1、1.0、10μg/ml)的脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体处理可抑制前脂肪细胞增殖，影响脂肪细胞的脂肪合成但对脂肪细胞无明显的细胞毒作用，可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改变，经流式细胞仪检测出的脂肪细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.01)。提示：脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体可抑制前脂肪细胞增殖，影响脂肪细胞脂肪的合成，诱导脂肪细胞凋亡。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文部分缩写字母的中英文对照

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引言

第一篇文献综述

第一章猪脂肪组织的发育与脂肪沉积规律

第二章猪脂肪沉积调控的研究进展

第三章脂肪细胞膜免疫调控猪脂肪沉积的研究进展

第四章卵黄抗体技术及其在养猪生产中的应用

第二篇试验研究

系列一脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对猪脂肪沉积的影响

第五章脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体的制备及稳定性研究

第六章脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体的生物安全性评价

第七章脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体对猪生长性能和胴体品质的影响

系列二脂肪组织细胞膜蛋白卵黄抗体影响猪脂肪沉积的机制研究

第八章日粮添加脂肪细胞膜蛋白抗体对猪脂肪代谢相关激素和酶活性的影响

第九章脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体对猪脂肪组织凋亡相关基因表达的影响

第十章脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体对离体脂肪细胞凋亡的影响

总体讨论

结 论

致 谢

攻读博士期间发表的论文