长春花组织培养技术研究

摘要

长春花(Catharanthus roseus(Linn) G. Don)，为夹竹桃科多年生草本或亚灌木植物，其生长适应能力强，全年花期，并且体内含有多种生物碱类，因此在医学药用和园林绿化观赏等方面广泛应用。在转基因等方面的组织培养技术尚不完善，因此，研究长春花组织培养体系，具有较高的经济效益、生态效益和社会效益。 本试验选用本实验室海南基地长春花种子为试验材料，研究在不同外源激素配比及不同培养条件下再生植株的适宜培养基和培养条件，以及影响长春花分化、生长、生根的各种因子。实验结果如下： 1．长春花种子消毒处理，最佳方案是：肥皂水浸泡30 min，自来水冲洗36 h，在超净工作台上先用质量分数0.1％HgCl<,2>溶液浸泡10～15 min，无菌水冲洗4～6次，再用质量分数10％次氯酸钠消毒5～10 min，无菌水冲洗4～6次，再用体积分数70％乙醇浸泡60 s，无菌水冲洗4～6次。 2．以长春花幼嫩叶片、叶柄、下胚轴为外植体，不同种类、不同浓度的植物生长调节物质及其组合对愈伤组织诱导的效应均不相同。 3．6-BA、NAA组合中，以叶片为外植体时长春花愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+6-BA 3.0 mg·L<'-1>+NAA 0.5 mg·L<'-1>+蔗糖30 g·L<'-1>+琼脂7 g·L<'-1>，诱导率达到95.3％；以叶柄为外植体时长春花愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+6-BA 3.0 mg·L<'-1>+NAA 1.0 mg·L<'-1>+蔗糖30 g·L<'-1>+琼脂7 g·L<'-1>，诱导率达到86.9％；以下胚轴为外植体时长春花愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+6-BA 3.0 mg·L<'-1>+NAA 0.5 mg·L<'-1>+蔗糖30 g·L<'-1>+琼脂7 g·L<'-1>和MS+6-BA 3.0 mg·L<'-1>+NAA 1.0 mg·L<'-1>+蔗糖30 g·L<'-1>+琼脂7 g·L<'-1>，诱导率达到88.6％和89.0％。 4．单独使用KT时，各浓度下叶片、叶柄和下胚轴均无愈伤组织产生。 5．再分化的研究表明：利用由叶片、叶柄和下胚轴诱导而来的愈伤组织能分化出芽点，虽最初芽分化率不高，但可以大量增殖。芽增殖的芽增值最佳培养基配方是：MS+6-BA 2.0 mg·L<'-1>(2.5 mg·L<'-1>)+IBA 0.2 mg·L<'-1>+GA<,3> 1.0mg·L<'-1>，而1/4 MS+IBA 1.5 mg·L<'-1>+NAA 0.05 mg·L<'-1>+活性炭0.5 mg·L<'-1>是诱导生根的最佳组合。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩略词表

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第一章文献综述

1.1长春花的生物学特性

1.1.1长春花的形态特征与品种

1.1.2栽培管理技术要点

1.1.3应用价值

1.2植物组织培养生产药物的研究进展

1.2.1植物组织培养生产药物的优点

1.2.2植物组织培养生产药物的研究

1.3长春花生物碱类药物研究

1.3.1长春花类药物作用机理

1.3.2从长春花植物材料中提取生物碱

1.3.3通过细胞工程获得长春花生物碱

1.4长春花细胞组织培养研究进展

1.4.1基本培养基与外植体的选择

1.4.2细胞生长及细胞培养物中药用成分含量的影响因素

1.4.3发根的影响因素

1.4.4长春花细胞组织培养的前景展望

第二章长春花组织培养再生体系的建立

2.1试验材料与方法

2.1.1供试材料

2.1.2试验设计

2.1.3实验步骤

2.2结果与分析

2.2.1诱导愈伤组织

2.2.2愈伤组织的分化

2.2.3芽的增殖

2.2.4长春花子叶节丛生芽的诱导

2.2.5生根培养基的选择和苗的移栽

2.3讨论

2.3.1愈伤组织形态、颜色与丛芽增殖的关系

2.3.2生长调节物质的作用

2.3.3活性炭的作用

第三章全文结论

参考文献

附图

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致谢