植物内生真菌HCCB1621生物活性物质的初步研究

摘要

植物内生菌作为一个多样性十分丰富的微生物类群，代谢产物非常丰富，包括杀虫、抗菌、抗肿瘤等活性物质，是人们寻找新型抗菌、抗肿瘤药物的重要资源。本论文利用上海来益生物药物研发中心的植物内生菌资源，通过各种模型的筛选，在获得活性菌株的基础上，对其中的一株进行了菌种鉴定，并对它们的次级代谢产物进行分离、纯化及活性初步研究。主要研究工作包括以下几个方面： 对1280株植物内生真菌进行了模型筛选样品的制备，共获得1280份样品，经模型初筛、复筛，共获得21份活性高且稳定的抗肿瘤细胞样品，8份具有较强抗菌活力的样品，选取其中一株HCCB1621进行了进一步的研究。 利用传统分类学方法、电子显微镜观察、18S rDNA和ITS序列的测定以及系统发育分析对菌株HCCB1621进行鉴定分类，根据各种指标鉴定其为木霉属真菌绿色木霉(Trichoderma viride)。 通过对菌株HCCB1621发酵产物的特性探索，发现活性物质具有热稳定性，在60℃处理1h，活性不丧失；经发酵培养 120h，产物抗肿瘤活性达到最强；活性物质在pH4-9范围内较稳定。 对菌株HCCB1621的代谢产物进行研究，应用大孔吸附树脂、溶媒萃取、硅胶柱分离、凝胶LH-20、HPLC制备等多种分离纯化手段，从其发酵液共分离出5个化合物，分别命名为HCCB1621-1，HCCB1621-2，HCCB1621-3，HCCB1621-4，HCCB1621-5，并对这些代谢产物进行质谱和核磁共振的<'1>H-NMR和<'13>C-NMR及二维图谱的解析，确认其分子量分别为256，396，112，376，110Da，并鉴定了HCCB1621-1～4的结构：分别为8，10-三甲基-四氮萘-2，4(3H，10H)二酮；麦角甾-7，9，22-三烯-3-醇；2，4(1H，3H)-嘧啶二酮；7，8-二甲基-10-(1’-D-核糖基)-异咯嗪，俗称核黄素。其中HCCB1621-1对A549、LoVo细胞具有一定的抑制作用，当浓度达到10μg/ml时，对直肠癌细胞LoVo的抑制率最高可达78.95％。对HCCB1621-5的抗菌效果进行研究发现，其对藤黄微球菌、白色念珠菌具有一定的抑制作用，对藤黄微球菌，相同浓度下其抑制效果较广谱性抗生素环丙沙星略差，达到其抑菌效果的71％。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：符号及缩略语

声明

第一篇文献综述

前言

1植物内生菌概况

1.1植物内生菌的概念及研究历史

1.2植物内生菌的分离和培养

1.3植物内生菌的生物多样性

1.4.植物内生菌之间及其与宿主植物之间的关系

1.5植物内生菌的作用

2植物内生菌的开发和应用

2.1植物内生菌在医药领域的开发和应用

2.2植物内生菌在涉农领域的开发和应用

3植物内生菌产生活性代谢产物的理论研究

3.1生物间的“基因水平传递”及“内共生理论”

3.2生物之间的相互作用和“协同进化”

4立题依据

5本实验拟采用的技术线路

第二篇试验部分

第一章植物内生真菌活性菌株的筛选

1试验材料

2.试验方法

3试验结果

4小结与讨论：

第二章植物内生真菌HCCB1621的分类鉴定

1.试验材料

2试验方法

3结果

4小结与讨论

第三章菌株HCCB1621代谢产物的分离纯化、结构鉴定

1试验材料

2.实验方法

3结果与分析

4.小结与讨论

全文总结

参考文献

致谢

本论文创新之处：

硕士研究生阶段发表论文：

附录