产酶溶杆菌OH11胞外多糖合成相关基因的克隆及其与生物膜形成的关系

摘要

利用质粒pSC137（含CmR的mariner转座子）对OH11进行转座诱变，成功构建了Lysobacter enzymogenes OH11的转座子插入文库。通过表型筛选，从5000个接合子中筛选到2个胞外多糖突变株OE1和048和1个脂多糖突变株OE3.在MM平板上，OE1和OE3菌落干燥，边缘皱缩；048菌落粘性增加。利用任意PCR技术，快速鉴定了OE1、OE3和048中转座子的插入位点。序列分析表明，在OE3中，转座子插入到了ABC(ATP-Binding Cassette)转运系统的关键基因中，该基因编码一个Permease蛋白。在048中，转座子插入到TypeⅣ泌出系统的关键基因中，该基因编码一个Pilin蛋白。在OE1中，转座子插入的基因在公共数据库中没有同源基因，提示该基因可能是L．enzymogenes特有的胞外多糖合成相关基因。生物膜试验表明，OE3能正常形成生物膜，而OE1和048形成生物膜的能力显著降低，同野生型相比，OE1和048形成生物膜的能力分别下降95％和82%。本研究是利用mariner转座子随机诱变并结合任意PCR对L．enzymogenes进行基因克隆的首饮报道。该方法为L.enzymogenes功能基因克隆提供了技术平台，也为研究胞外多糖和脂多糖与L.enzymongenes定殖的相关性奠定了研究基础