葡萄三倍体新株系的获得

摘要

本研究主要通过二倍体和四倍体杂交选育三倍体葡萄新品系。二倍体亲本为2004-6-12、大濑户、巴拉多、美人指和亚历山大（分别简称为6、D、B、M、A），四倍体亲本包括高鲁碧、安芸皇后和翠峰（分别简称为G、Q、S），其中2004-6-12、大濑户、巴拉多为雄性不育（雌能花）单株，其他亲本均为完全花品种。共有21个杂交组合。分别于人工杂交后37天、42天、47天、52天和57天采集未成熟果实，进行胚挽救培养。幼胚萌发后，经过扩繁，对幼苗进行了温室炼苗移栽。本研究对影响胚挽救的胚珠发育培养基、胚珠处理方式和不同倍性亲本的杂交亲和性等因素进行了探讨，对二倍体×四倍体葡萄获得的杂种幼苗进行了倍性鉴定。另外采集成熟种子沙藏后田间播种，获得杂种苗，并且在四倍体自交后代中选育得到三倍体植株。取得的主要研究结果如下:
　　 1.获得了一批三倍体葡萄单株利用二倍体和四倍体葡萄杂交培育三倍体葡萄新品系。采用胚挽救技术对杂交后的幼胚进行培养，获得了41个杂种单株，另外通过田间播种获得了12个杂种单株。综合利用流式细胞仪检测、染色体观察、形态学比较（气孔观察等）和分子标记等技术，在幼苗期进行倍性检测和遗传鉴定，确定6Q47-1，6Q52-1，6Q52-3，6S52-3，6S52-5，DG42-1, DG42-2, BQ52-5, AS52-1, MS52-2, MS47-1, MS47-2, MS47-3, MS57-2,BG-003，BG-005，MS-002，MS-003等18个单株为三倍体，其他杂种单株均为二倍体。
　　 2.以二倍体和四倍体葡萄杂交获得的未成熟合子胚为材料，成功诱导了体细胞胚发生。
　　 初生胚诱导培养基为NN69+NAA1.80 mg·L-1+CH0.4 mg·L-1+AC2 g·L-1+蔗糖30g·L-1，52 DAP和47 DAP取样培养时，初生胚诱导率分别达到11.11％和16.67％;次生胚诱导培养基分别为3/4MS+IBA0.35mg·L-l+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1和MS+6-BA1.5 g·L-1+IBA0.2 g·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂6 g·L-1;体细胞胚在扩繁培养基上再生植株。利用流式细胞仪和SSR标记检测源自同一未成熟合子胚（胚珠）的不同株系的遗传稳定性，结果显示，所测植株均为三倍体，且都来自杂交所得的未成熟合子胚。
　　 3.从四倍体葡萄翠峰的自交后代中选育得到三倍体新品系5-11。
　　 采用形态学比较、流式细胞仪检测、染色体观察和SSR标记等技术对翠峰的实生后代株系进行检测，确定单株5-11为三倍体，且生长、结果状况良好。

目录

声明

摘要

缩略语

第一章 三倍体葡萄育种研究进展

1 三倍体葡萄育种技术

1．1 葡萄的无核性状与三倍体葡萄

1．2 三倍体葡萄的常规育种技术

1．3 葡萄胚挽救技术研究进展

2 果树倍性鉴定方法的研究进展

2．1 形态学观察

2．2 流式细胞术

2．3 染色体观察法

2．4 分子辅助标记鉴定

3 本研究的目的和意义

参考文献

第二章 二倍体与四倍体葡萄杂交及通过胚挽救获得杂种苗

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 育种途径

1．3 数据统计

2 结果与分析

2．1 花粉生活力及自交、杂交座果情况

2．2 通过未成熟胚的胚挽救培养获得杂种苗

2．3 胚挽救杂种苗的移栽

2．4 杂交种子田间播种后萌发情况

3 讨论

3．1 不同倍性葡萄间的杂交亲和性和三倍体育种时胚挽救的必要性

3．2 胚挽救最佳取样时期的确定

3．3 培养基成分对胚挽救成功率的影响

3．4 珠被处理方式对胚挽救的影响

参考文献

第三章 葡萄杂种幼苗的倍性及遗传鉴定

1 实验材料

2 实验方法

2．1 流式细胞仪检测杂种苗倍性

2．2 染色体观察法确定杂种苗的染色体条数

2．3 形态学观察

2．4 SSR技术鉴定幼苗的杂合状态

2．5 数据统计

3 结果与分析

3．1 流式细胞仪检测初步确定三倍体

3．2 通过染色体观察法确认三倍体

3．3 三个杂交组合的亲本和三倍体子代的气孔观察

3．4 杂交后代的遗传鉴定

4 讨论

参考文献

第四章 葡萄未成熟胚诱导体细胞胚发生、植株再生与遗传鉴定

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 胚挽救和体细胞胚诱导

1．3 体细胞胚再生植株及移栽

1．4 体胚再生植株的遗传稳定性检测

2 结果与分析

2．1 未成熟合子胚诱导初生胚和次生胚发生

2．2 体细胞胚再生植株及移栽

2．3 体胚再生植株的遗传稳定性检测结果

3 结论与讨论

参考文献

第五章 利用四倍体自交获得三倍体新品系

1 材料与方法

1．1 材料来源

1．2 检测方法

2 结果与分析

2．1 植物学特性比较

2．2 流式细胞仪检测结果

2．3 染色体观察确定田间优株2004-5-11为三倍体

2．4 利用SSR标记技术确定单株的遗传来源

3 讨论

参考文献

全文结论

主要创新点

附录

攻读硕士学位期间所发表论文

致谢