复合双歧杆菌油乳剂的研制及其防治仔猪腹泻和促生长效果的研究

摘要

微生态制剂以其无毒副作用、无残留、无耐药性、调整肠道菌群平衡、预防二重感染、提高机体免疫力、提高综合抗病力、降低发病率，并能分泌多种酶、提高消化率、促生长、降低养殖成本、提高动物产品品质、提高食品安全和丰富食品风味、提高瘦肉率、并能提高有害物质（胺、氨）从体内的排出率，降低圈舍中粪臭素、吲哚、氨气等有害气体的浓度等诸多优势受到人们的关注。尤其在替代抗生素作为促生长剂方面到受到世人的青睐。越来越多的国家反对用抗生素作为生长促进剂，欧盟和韩国已通过立法加以禁用。抗生素的替代物已成为高科技研究领域的热点。
　　 本研究重点从三个方面进行探讨:
　　 1复合双歧杆菌油乳剂菌种的选择和鉴定以及复合双歧杆菌油乳剂的制备
　　 本研究使用的益生菌菌种是由广东现代农业集团研究院有限公司微生态制剂研究室保存的猪源乳酸杆菌9084、双歧杆菌9024和粪链球菌9038，通过菌种的菌落形态、镜检、生理生化和PCR方法对菌种属和种的鉴定，确定9084为短乳杆菌、9024为长双歧杆菌、9038为粪链球菌，然后进行发酵培养、收集菌体、添加保护剂、冷冻干燥以及油乳化过程制成双歧杆菌复合油乳制剂。
　　 2复合双歧杆菌油乳制剂产品在不同温度条件下保存的稳定性研究
　　 微生态制剂产品的活菌数是保证产品稳定性的主要指标，本试验设定了双歧杆菌复合油乳剂常温和37℃条件下活菌数测定，对复合双歧杆菌油乳剂的稳定性进行了研究。研究结果表明:在常温下对复合双歧杆菌油乳剂活菌数进行测定，每15天测定一次，活菌数下降比较稳定;5个月后，复合双歧杆菌油乳剂的活菌数仍然能达到108cfu/g。在37℃条件下保存的双歧杆菌复合油乳剂每两周测定一次，在前3个月活菌数下降较慢，3个月以后，活菌数下降加快。在4个月以后，活菌数下降到106cfu/g。综上所述，在保证活菌数维持在108cfu/g的前提下，试验研制的复合双歧杆菌油乳剂制剂能在常温下保存5个月，在高温炎热的条件下(37℃)保存三个月。
　　 3复合双歧杆菌油乳制剂防治仔猪腹泻，提高成活率的作用，促生长效果的研究
　　 动物试验以哺乳仔猪为研究对象，通过灌喂复合双歧杆菌油乳剂溶液，研究其对哺乳仔猪腹泻防治效果和生长性能的影响。试验选择144头1.50 kg左右的1日龄健康长白纯种仔猪，分6组，其中高、中、低3个试验组，1个空白对照组，1个抗生素对照组，1个同类国外产品（普乐康）对照组，每组3个重复，每个重复8头仔猪。试验仔猪在21日龄断奶，试验分两个阶段:预试期1-7日龄，正试期为断奶前、后分别一周，即14-28日龄。试验结果表明，复合双歧杆菌油乳剂能有效预防扣治疗仔猪腹泻。在预试期阶段，复合双歧杆菌油乳剂能降低仔猪腹泻率，试验组低、中、高剂量组的腹泻率都明显低于空白组，分别比空白组低7.05％，10.9％，1.94％。中剂量组腹泻率低于抗生素对照组，而与国外产品普康乐相比，相差不多。试验高剂量组的腹泻率明显高出抗生素组和普乐康组，与空白组比较接近，这是由于油乳剂中的油量比较大，对哺乳仔猪有一定的影响。综合整个试验期，复合双歧杆菌油乳剂能有效预防和治疗仔猪腹泻。试验组低、中、高剂量组的腹泻率都明显低于空白组，分别比空白组低出2.43％、5.71％、2.08％，中剂量组的腹泻率低于抗生素组和空白组，而与国外产品普乐康相比相差不多。在提高哺乳仔猪日增重方面，在1-7天，复合双歧杆菌油乳剂在促生长效果中，中剂量组明显高于其他组，并且中剂量组平均日增重与空白组和抗生素组相比差异显著(P＜0.05)，在1-28天，复合双歧杆菌油乳剂在促生长效果中，中剂量组与空白组和抗生素对照组相比差异显著(P＜0.05)，说明此种双歧杆菌油乳剂对仔猪促生长有明显的作用，且中剂量组所用的油剂量为最适剂量。

目录

声明

摘要

缩略语及符号

前言

第一章 文献综述

1 微生态制剂的产生背景

2 微生态制剂的概念及分类

2．1 概念

2．2 分类

3 益生菌概述

3．1 益生菌定义的发展过程

3．2 益生菌菌株的选择标准

4 益生菌的生理功能及作用机理

4．1 调节胃肠道功能

4．2 促生长作用

4．3 免疫调节作用

4．4 抗肿瘤作用

5 可用于微生态研制的益生菌

6 实验菌种介绍

6．1 双歧杆菌(Bifidobacterium)

6．2 乳酸杆菌(Lactobacillus Beijerinck)

6．3 粪链球菌(Streptococcus faecalis)

7 益生菌制剂的生产工艺

7．1 喷雾干燥技术

7．2 真空冷冻干燥技术

7．3 包埋技术

8 益生菌制剂的研究进展

9 益生菌制剂存在的问题

10 研究展望

11 题研究的目的和意义

参考文献

第二章 实验菌种的鉴定

1 实验材料

1．1 实验菌种

1．2 培养基

1．3 主要试剂

1．4 主要仪器

2 实验方法

2．1 培养基的制备

2．2 菌种复苏

2．3 实验菌种总DNA的提取

2．4 引物的设计与合成

2．5 PCR反应体系与条件

2．6 PCR产物的回收

2．7 感受态细胞的制备

2．8 连接

2．9 转化

2．10 重组菌鉴定

2．11 实验菌株的生化鉴定

3 实验结果

3．1 实验菌种形态、生物学特性

3．2 PCR回收产物的鉴定结果

3．3 克隆菌落PCR鉴定结果

3．4 16SrDNA序列测定结果

3．5 生化实验结果

4 讨论

4．1 LYT培养基

4．2 鉴定方法

参考文献

第三章 复合双歧杆菌油乳剂的制备工艺及稳定性检测实验

1 实验材料

1．1 实验菌种

1．2 培养基

1．3 稳定性实验样品

1．4 主要试剂

1．5 主要仪器

2 实验方法

2．1 种子液的制备

2．2 实验菌种固体扩增培养

2．3 冻干保护剂的制备

2．4 保护剂梯度选择实验

2．5 预冻时间和预冻温度的选择

2．6 双歧杆菌复合制剂的冻干油乳化

2．7 活菌计数平板的制备方法

2．8 平板活菌计数计算方法

2．9 冻干存活率的计算

2．10 传代菌种活力检测实验

2．11 实验菌种稳定性检测实验

3 实验结果

3．1 保护剂梯度选择结果

3．2 预冻时间和预冻温度的选择结果

3．3 传代菌种活力检测实验结果

3．4 实验菌种稳定性检测结果

4 讨论

4．1 关于固体发酵的讨论

4．2 关于保护剂及预冻温度的讨论

4．3 关于稳定性实验的讨论

参考文献

第四章 复合双歧杆菌油乳剂对哺乳仔猪腹泻和生长性能的影响

1 试验材料

1．1 试验动物

1．2 复合双歧杆菌油乳剂

1．3 饲料基础日粮

2 试验方法

2．1 试验动物的分组

2．2 试验药品饲喂设计

2．3 饲养管理

2．4 指标测定与方法

2．5 试验数据处理

3 试验结果

3．1 预试期试验结果

3．2 正试验期试验结果

4 试验讨论

4．1 双歧杆菌复合油乳剂对仔猪生长性能的影响

4．2 双歧杆菌复合油乳剂对仔猪腹泻的影响

参考文献

全文结论

致谢