烟盲蝽卵黄原蛋白基因的克隆及其表达的营养调控

摘要

营养是影响天敌昆虫繁育的关键因素之一。卵黄原蛋白表达的营养调控对天敌昆虫扩繁具有一定作用。通过分析昆虫卵黄原蛋白的结构，找到影响昆虫生长发育的主要部分，可更好地控制昆虫的繁殖。本研究克隆出烟盲蝽的卵黄原蛋白基因，分析烟盲蝽卵黄原蛋白序列与其它昆虫卵黄原蛋白之间的进化关系;用荧光定量的方法比较饲喂不同饲料的烟盲蝽卵黄原蛋白基因的表达量发现，营养可影响烟盲蝽卵黄原蛋白的表达量。本文的主要结果与结论总结如下。
　　1.烟盲蝽卵黄原蛋白基因的克隆
　　比较不同昆虫的Vg基因，设计兼并引物，进行PCR扩增Vg基因片段，利用RACE技术克隆出Vg基因的两端。克隆的卵黄原蛋白基因长度为6310bp，开放阅读框(ORF:57-5985)，长为5919bp，编码1972个氨基酸，推测该基因的第1-17个氨基酸残基为信号肽序列，预测蛋白质分子量为216KD，等电点约为9.12。丝氨酸(S)占15.5％，天冬氨酸(N)占5.22％，谷氨酰胺(Q)占7.09％，丙氨酸(A)占9.83％。
　　2.饲喂不同饲料的烟盲蝽卵黄原蛋白基因的表达量
　　运用荧光定量PCR分析饲喂米蛾卵(A)、柞蚕蛹(B)、酵母提取液(C)的烟盲蝽Vg基因表达量。荧光定量得到的卵黄原蛋白的相对表达量分别为:A为1.40904;B为0.00615;C为0.000225，饲喂A的Vg表达量明显高于饲喂人工饲料B、C的，同时B饲料的表达量明显高于C。亦即，饲喂米蛾卵的烟盲蝽的产卵量高于饲喂柞蚕蛹匀浆液的，饲喂柞蚕蛹匀浆液的表达量高于添加酵母的，由本实验可以得出饲喂不同饲料的烟盲蝽卵Vg的表达量明显的不同，说明烟盲蝽卵黄原蛋白对烟盲蝽的繁殖有直接影响。

目录

声明

摘要

第1章 文献综述

1．1 烟盲蝽研究概况

1．1．1 烟盲蝽生物学特性

1．1．2 烟盲蝽种群动态的变化

1．1．3 烟盲蝽与植物的关系

1．1．4 作为天敌昆虫在生物防治上的地位

1．2 捕食性蝽人工饲料研究进展

1．3 昆虫卵黄原蛋白基因研究进展

1．4 卵黄原蛋白与生殖的关系

1．5 本学位论文的研究意义、内容和技术路线

1．5．1 研究意义

1．5．2 研究内容

1．5．3 技术路线

第2章 烟盲蝽卵黄原蛋白基因的克隆

2．1 材料与方法

2．1．1 供试材料

2．1．2 主要仪器设备

2．1．3 主要试剂

2．1．4 实验方法

2．1．5 5’与3’RACE实验过程

2．2 结果与分析

2．2．1 电泳图

2．2．2 烟盲蝽卵黄原蛋白基因生物信息分析

2．2．3 烟盲蝽卵黄原蛋白基因的cDNA序列分析

2．2．3 进化树构建

2．3 讨论

第3章 饲喂不同人工饲料的烟盲蝽卵黄原蛋白基因的表达量

3．1 材料与方法

3．1．1 人工饲料的配制、制作及饲喂方法

3．1．2 饲喂不同的人工饲料对烟盲蝽成虫繁殖力影响的方法

3．1．3 饲喂不同饲料的烟盲蝽卵黄原蛋白表达量的方法

3．1．4 数据处理

3．2 结果与分析

3．2．1 饲喂不同的人工饲料对烟盲蝽成虫繁殖力的影响

3．2．2 荧光定量测定饲喂不同饲料的烟盲蝽卵黄原蛋白表达量

3．3 讨论

全文结论与创新点

参考文献

攻读硕士期间发表论文

致谢