白及组织培养及组培苗生长营养调控研究

摘要

白及（Bletillae Rhizoma）为兰科多年生草本植物白及(Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f)的干燥块茎;具有补肺、止血、散风除湿、通窍止痛、消肿排脓、生肌、敛疮的功效，是我国传统中药材（《中国药典》2010版）。白及种子较小，野生条件下在真菌共生时才可萌发，实生苗的栽培技术尚不成熟，而传统无性繁殖技术效率低。近年来白及市场需求量剧增，供需矛盾突出，白及组培快繁体系的建立与完善工作亟需精进。本试验以白及种子为外植体建立白及快繁体系，研究其成苗技术及移栽条件;并研究野生白及内生真菌种群的异同，试图模拟野生白及微生物环境，为提高白及移栽成活率建立基础。主要内容如下:
　　1.白及种子无菌萌发需光。1/2 MS适宜作为白及种子萌发基本培养基。NAA有利于白及种子萌发率，添加1.0 mg·L-1NAA及1.6 mg·L-16-BA对白及萌发促进效果最明显;椰汁替代培养基中的蔗糖可提高白及种子诱导形成原球茎，添加土豆泥白及萌发率未见提高。考虑在12h/12h光周期下，以1/2 MS+1.0 mg·L-1NAA+1.6 mg·L-16-BA为萌发培养基培养获得组培苗，种子萌发率可达98％(50 d)，且组培苗生长健壮;以1/2 MS+20％椰汁为培养基获得白及原球茎。
　　2.MS为基本培养基可促进组培苗生长;添加10 mg·L-1黄腐酸，并以10％椰汁和5％香蕉汁替代其中的蔗糖可促进白及壮苗;添加25 mg·L-1腐植酸对白及生根有利。各种培养基上白及培养时间均不宜过长。土豆及酵母粉对白及生长的影响需进一步研究确定。
　　3.研究NH4+-N和NO3--N对白及组培苗生长的影响，发现铵硝比为75∶25较适宜白及生长，白及组培苗在铵态氮含量多于硝态氮时生长较好;全铵态氮或全硝态氮均不利白及生长，铵硝比为50∶50时，白及叶片生理活性较高。
　　4.研究K+浓度对白及组培苗生长的影响，发现K+浓度为26.85 mmol·L-1时，白及植株生长良好，且叶片中总叶绿素含量最高;在一定浓度范围内，增施K+提高白及叶片SOD、POD活力及可溶性蛋白含量，减少了MDA的积累。为促进白及组培苗生长，应提高培养基中K+含量，较适宜浓度为26.85 mmol·L-1。
　　5.土豆提取液、椰汁及香蕉汁等有机添加物对白及生长均有一定促进作用。不同的植物激素对白及生长具有不同的调控作用。NAA有助于促进白及地上部分生长，同时添加6-BA对白及植株生长有利;2，4-D能成功诱导白及组培苗形成愈伤组织;1.0mg·L-1 KT对白及叶片生长最为有利。
　　6.在一定浓度范围内，提高培养基中Ca2+含量有利于促进白及组培苗生长，提高白及叶片生理活性。浓度为4.10 mmol·L-1时，白及生长良好，叶片叶绿素a、类胡萝卜素及总叶绿素含量到达最高;同时，白及叶片POD活力最高。当Ca2+浓度为3.40mmol·L-1时，白及叶片SOD活力、可溶性蛋白含量最高，MDA积累最少。
　　7.白及苗生长阶段对移栽成活率影响较大，株高太大或太小对成活不利，株高49.75 mm左右时，白及移栽2个月后成活率可达64％。各种基本基质上白及成活率由高至低依次为:东北黑土＞菌肥土＞蛭石＞花卉营养土，添加木屑有利于白及成活，东北黑土与木屑1∶1混合为较适宜的白及组培苗移栽基质。
　　8.对白及根系中分离得到的真菌菌株DNA基因组进行ITS序列分析，发现白及根系中内生菌群主要为Trichoderma.Koningiopsis和Hypocre.Koningii。

目录

声明

摘要

缩略词

第一章 文献综述

第一节 兰科植物繁殖生物学及其与共生真菌研究概述

1 繁殖生物学研究现状

2 菌根真菌与兰科植物共生关系研究

第二节 白及研究进展

1 白及无菌萌发与组织培养

2 化学成分及药理研究

6．课题的目的与意义

第二章 白及种子无菌萌发特性研究

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

1．3 数据分析

2 结果与分析

2．1 不同处理白及种子萌发和组培苗发育过程

2．2 基本培养基、生物添加剂及光周期对白及种子萌发的影响

2．3 激素对白及种子无菌萌发的影响

2．4 不同激素对白及萌发影响的多重比较

3 讨论

第三章 自及组培苗生长条件及成苗技术研究

第一节 基本培养基及有机添加物对白及组培苗生长的影响

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第二节 氮素形态对白及生长影响研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第三节 K+对白及组培苗生长的影响

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第四节 白及组培苗生长调控研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第五节 Ca2+对白及组培苗生长的影响

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第六节 白及组培苗移栽技术研究

1 材料与方法

2 结果与分析

3 讨论

第四章 白及内生真菌的分离与鉴定

1 材料与方法

1．1 样品采集

1．2 真菌分离

1．3 特异性片段PCR扩增

1．4 序列分析

2 结果与分析

3 讨论

全文结论

参考文献

发表论文

致谢