斑马鱼胸腺和头肾的结构特征及其组织样品的制备程序

摘要

斑马鱼（Danio rerio）是一种热带淡水硬骨鱼，具有体型小、繁殖能力强、胚胎发育透明等优点。作为新型模式动物斑马鱼广泛应用于遗传学、肿瘤生物学、发育生物学和环境监测等诸多领域。近年来，斑马鱼在免疫学研究中的应用日益广泛，胸腺和头肾是斑马鱼重要的免疫器官和造血器官，其在组织学方面的研究逐渐受到重视。但是由于斑马鱼体型小，胸腺和头肾取材十分困难，迄今为止，胸腺和头肾形态学方面的研究相对滞后，相关的报道也很少。本研究从形态学角度阐述斑马鱼胸腺和头肾的组织结构、细胞的超微结构以及增龄性变化等。研究结果不仅为建立和丰富斑马鱼脏器的生理数据库奠定基础，还有利于推动实验动物结构特征的网络化共享。同时，对斑马鱼胸腺和头肾的正常组织形态学的研究，可以为相关的病理和毒理实验提供组织形态学参考。
　　试验Ⅰ斑马鱼胸腺的显微和超微结构
　　应用光镜观察斑马鱼胸腺组织结构，胸腺可分为皮质区和髓质区。皮质外区有数层扁平上皮细胞，皮质内区有大量的淋巴细胞，髓质区淋巴细胞数量少，网状上皮细胞数量相对较多。同时，观察到了黑色素巨噬细胞中心、肌样细胞、髓质上皮囊、血胸屏障、黏液细胞、脂肪组织等结构成分。根据不同日龄斑马鱼胸腺的形态学变化，分析了斑马鱼胸腺具体的退化方式。在透射电镜下，观察到淋巴细胞、细胞残体以及上皮细胞的内部超微结构。上皮细胞根据形态上的明显差异可以分为两种类型，Ⅰ型网状上皮细胞形状不规则，细胞器发达，胞体长，充分与周围淋巴细胞接触;Ⅱ型网状上皮细胞体积明显比淋巴细胞大，核大且位于中央。
　　试验Ⅱ斑马鱼头肾的显微和超微结构
　　应用光镜观察斑马鱼头肾组织结构，头肾实质外部有少量胶原纤维包裹。幼龄斑马鱼头肾内部呈模糊的网状，有大量的淋巴细胞和血细胞，少量颗粒细胞、甲状腺滤泡和滤泡上皮细胞。在1年龄的斑马鱼头肾中观察到了大量颗粒细胞和肾上腺细胞。通过免疫组织化学方法，比较不同日龄斑马鱼头肾中，造血干/祖细胞的数量差异，分析造血能力的变化。应用透射电镜观察到头肾中有巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞，两种颗粒细胞的增龄性变化明显，胞浆中，分别含有梭形和卵圆形的黏性颗粒。
　　试验Ⅲ斑马鱼胸腺和头肾的光镜和电镜样品制备
　　斑马鱼体型小，胸腺和头肾等器官取材困难。本章节就实验中斑马鱼胸腺和头肾的取材及处理方法进行详细描述，力图将斑马鱼相关器官的光镜和电镜样品处理程序化。研究内容包括透射电镜样品处理、染色，光镜样品处理、H-E染色、PAS染色和Gordon Sweets网状纤维染色。通过上述处理，取得了理想的观测结果。有利于使斑马鱼胸腺、头肾以及其他器官的形态学观测样品处理的操作标准化，为斑马鱼在环境监测等领域的广泛应用提供程序化的操作步骤。

目录

声明

摘要

前言

第一章 鱼类胸腺

1 鱼类胸腺的解剖学位置

2 鱼类胸腺的结构及其功能

3 鱼类胸腺的进化

4 胸腺的增龄性变化

4．1 胸腺的发育

4．2 胸腺的退化

第二章 鱼类头肾

1 鱼类头肾的解剖学位置

2 鱼类头肾的结构及其功能

3 肾脏的进化

4 头肾的增龄性变化

第三章 斑马鱼胸腺的显微超微结构

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 主要试剂

2．1 H-E染色结果的观测

2．2 PAS染色结果的观测

2．3 透射电镜结果的观测

3 讨论

第四章 斑马鱼头肾的显微超微结构

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器设备

1．4 免疫组织化学法

2 结果

2．1 H-E染色结果的观测

2．2 PAS染色结果的观测

2．3 Gordon Sweets网状纤维染色结果的观测

2．4 透射电镜结果的观测

2．5 免疫组织化学染色结果的观测

3 讨论

第五章 斑马鱼光镜和透射电镜样品的制备

1 光镜样品的制备

1．1 横切样品切片的制备

1．2 全鱼纵切样品切片的制备

1．3 H-E染色

1．4 PAS染色

1．5 网状纤维染色——Gordon Sweets染色

2 透射电镜样品的制备

3 结果分析

参考文献

全文总结

论文发表情况

致谢