杏鲍菇富硒优良菌株筛选与深层发酵及生物活性研究

摘要

杏鲍菇(Pleurotus eryngii)，别名刺芹侧耳，富含蛋白质、维生素及钙、镁等矿物质，具有抗氧化、降血脂、提高免疫力以及美容等作用。近年来，食用菌富硒相关研究已为开发富硒食品、药品、保健品提供重要途径，而我国近四分之三区域缺少硒元素，因此研发安全、健康有效的富硒相关产品具有重要意义。本论文对富硒杏鲍菇进行了较为系统的研究，主要通过对富硒杏鲍菇菌株筛选、液体菌种发酵条件优化、小鼠的急性毒性试验、提高免疫力及抗氧化能力测定等方面进行研究，为富硒杏鲍菇的研究与相关保健品开发奠定基础。主要研究结果和结论如下:
　　采用平板和摇瓶2种培养方式对16株优良菌株进行了筛选。结果表明:菌株Pr06、Pr10、Pr12和Pr154个菌株的日生长量最大，分别达到8.98、8.86、8.39和8.42 mm，与其他菌株相比差异均达极显著水平(P＜0.01);菌株Pr06、Pr10和Pr15在液体培养基中均长势好，菌球干重大。16株被试菌株的生长周期在47.86～67.41 d，子实体产量在32.15 g/瓶～81.25 g/瓶之间，差异均达极显著水平(P＜0.01)。综合考虑生长周期、子实体产量等因素，发现菌株Pr10在培养基中生长速度快，菌球大小均匀，接种至栽培料后发菌速度较快，因此选用Pr10菌株为后续试验研究菌株。
　　研究了液体培养基中硒浓度对杏鲍菇菌丝体产量及富硒量、菌丝体粗蛋白和粗多糖的影响，最终确定中浓度(50μg/g)亚硒酸钠添加量为下一步的液体培养基的硒添加浓度。
　　研究并优化了杏鲍菇Pr10菌株对深层发酵条件。在培养条件为:温度25℃、初始pH6.0、接种量12％、装液量40％下，Pr10杏鲍菇的菌丝体生物量和硒含量最大。同时试验表明，以葡萄糖为最佳碳源，黄豆粉为最佳氮源，KH2PO4、MgSO4·7H2O为最佳无机盐离子。正交试验确定了杏鲍菇液体发酵的最佳培养基组成为:葡萄糖2％，黄豆粉3％，KH2PO40.025％，MgSO4·7H2O0.05％，按照上述分析得到的最佳培养基组合进行验证，得到菌丝体生物量为10.15 mg/mL，比优化前提高了29.13％;菌株硒含量为2138.52μg/g，比优化前的1642.36μg/g提高了30.21％。
　　对富硒杏鲍菇子实体干制品中主要成分、重金属及微量元素含量进行测定，结果表明:其主要成分中粗蛋白、粗脂肪、粗多糖、粗纤维和灰分的含量正常，符合国标(GB/T13078、GB/T13079、GB/T13081、GB/T13082)，其中粗多糖含量为22.57±1.24％，粗蛋白为21.42±1.32％，粗脂肪为3.76±0.11％,水分含量为4.24±0.01％。重金属含量检测均符合国家标准，在8种有益微量元素中矿物质元素中钙含量最高，达到472.36mg/kg。
　　对富硒杏鲍菇子实体进行小鼠急性毒理试验，施喂最大剂量2周内，施喂组与对照组的小鼠均未出现死亡现象，对小鼠解剖后其主要脏器无病变。小鼠进行富硒杏鲍菇子实体灌胃测定表明，小鼠的最大耐受量＞6267mg/kg，根据急性口毒性分级标准，富硒杏鲍菇子实体对小鼠属于无毒级物质。
　　进行了富硒杏鲍菇子实体对小鼠免疫力、抗氧化作用的药理试验，结果表明:“富硒杏鲍菇组的小鼠脏器指数与纯净水组、Na2SeO3组和不加硒普通杏鲍菇组相比较，均高于这3组。而富硒杏鲍菇子实体的水提液的DPPH自由基清除率分别达到72.69％、75％乙醇提取液的自由基清除率为69.72％,80％甲醇提取液为68.31％,三者与市售普通杏鲍菇子实体和液体发酵富硒杏鲍菇菌丝体干粉自由基清除率相比较，具有极显著差异(P＜0.01)”;比较富硒杏鲍菇组与对照组及Na2SeO3处理组、普通杏鲍菇处理组的小鼠全血和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性，富硒杏鲍菇子实体处理组显著高于对照组及Na2SeO3处理组、普通杏鲍菇，丙二醛含量显著低于对照组、Na2SeO3处理组及普通杏鲍菇处理组。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

1 硒与人体健康的关系

1．1 硒在人体中的分布及人体对硒的需要量

1．2 硒对人体的主要保健功能

2 国内外市场上的富硒产品

2．1 添加硒强化剂的富硒产品

2．2 生物转化获得的富硒营养食品

2．3 我国市场上的富硒产品

3 食用菌富硒研究

4 富硒杏鲍菇研究现状

5 食用菌深层发酵的研究

6 主要研究内容

第二章 富硒杏鲍菇优良菌株的筛选

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 试验方法

1．3 数据处理

2．1 固体平板培养基中杏鲍菇菌丝生长速度情况

2．2 液体培养基中菌丝生长情况

2．3 子实体产量及生长周期比较

2．4 液体培养基中硒浓度的确定

3 讨论

4 本章小结

第三章 富硒杏鲍菇液体菌种发酵条件的优化

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 试验方法

1．3 数据处理

2 结果与分析

2．1 培养条件优化

2．2 培养基成分的优化

3 讨论

4 本章小结

第四章 富硒杏鲍菇子实体营养成分与提高免疫力、抗氧化作用研究

1 材料与方法

1．1 仪器与试剂

1．2 试验方法

1．3 数据处理

2 结果与分析

2．1 富硒杏鲍菇子实体主要成分、重金属及微量元素含量

2．2 富硒杏鲍菇子实体急性毒性实验

2．3 富硒杏鲍菇提高小鼠免疫力、抗氧化的药理实验

3 讨论

4 本章小结

全文结论

参考文献

致谢

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