袋鼠馆气载需氧菌的初步研究及消毒剂筛选

摘要

空气中微生物的含量及组成成分是造成空气污染的主要原因，特别是一些致病性微生物的存在，加大了动物及人类的发病机率。南京红山森林动物园澳洲区的袋鼠一直以来受到众多游客青睐，但近年来园内袋鼠细菌性疾病多发，特别是齿槽感染及其继发症给袋鼠的饲养繁殖带来严重危害。在此种形势下，测定袋鼠馆空气中气载需氧菌浓度，了解微生物的分布情况，针对性进行环境卫生控制显得尤为重要。动物园对细菌性疾病的防治主要在于化学消毒剂及抗生素的使用，分析袋鼠馆常见致病菌群组成成分，对致病菌进行抗生素敏感性分析，可为日常防控及抗生素治疗提供指导意见。为保证日常消毒工作的有效性，给袋鼠提供一个清洁安全的生活环境，对袋鼠馆常用消毒剂进行评价，筛选出高效消毒剂显得十分必要。本试验通过以上研究，以期为加强袋鼠细菌性疾病的预防与控制提供理论依据。试验具体内容如下: 1.袋鼠馆气载需氧菌的初步研究 采用菌落自然沉降法对灰袋鼠馆及赤袋鼠馆运动场、缓冲道、袋鼠舍、人行道和饲料间五个区域一年四季的气载需氧菌浓度进行测定，通过16S rRNA基因和生理生化鉴定相结合的方法分析空气中的细菌组成，将分离到的细菌接种小鼠观察其致病性并采用药敏试纸片法分析致病菌株的耐药情况。结果显示，对不同区域而言，各馆袋鼠舍及饲料间的空气菌浓度明显高于其他区域，其中灰袋鼠舍污染最严重。对不同季节而言，赤袋鼠馆饲料间秋季菌浓度最高，其他区域夏季最高，冬季最低。灰袋鼠馆缺乏夏季数据，污染较严重的袋鼠舍、饲料间均以秋季菌浓度最高。从空气中成功分离鉴定出71株细菌，其中葡萄球菌属细菌最多，共37株，占分离菌的52.1％，马胃葡萄球菌为优势菌种。分离到肠杆菌科细菌31株，占分离菌的43.7％，其中大肠埃希菌为优势菌种。分离到链球菌属细菌3株，占分离菌的4.2％。筛选出致病菌6株，分别为2株大肠埃希菌、1株弗氏志贺菌、2株金黄色葡萄球菌及1株巴黎链球菌。药敏试验结果显示所有致病菌均对克林霉素耐药，对环丙沙星、氟苯尼考、庆大霉素、恩诺沙星及磺胺甲基异恶唑敏感。此外，不同菌株对其他不同药物存在不同程度的耐药情况。 2.袋鼠馆常用消毒剂的筛选 采用肉汤稀释法测定9种消毒剂对2种标准菌株（大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538）以及袋鼠舍分离菌株（8株大肠杆菌、5株金黄色葡萄球菌）的最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)，采用菌悬液定量杀菌试验测定9种消毒剂在推荐使用浓度下对2种标准菌株的杀灭效果，通过以上试验筛选出抑菌和杀菌能力均强的消毒剂进行现场消毒验证，综合评价消毒剂的消毒效果。结果显示，9种消毒剂中戊二醛癸甲溴铵、菌毒消、月苄三甲氯铵及过氧乙酸均能在相对较低的浓度抑制和杀死试验菌，其最低抑菌浓度分别为97.66mg/L、155.04mg/L、0.009％、0.031％，最低杀菌浓度分别为97.66mg/L、307.69mg/L、0.018％、0.062％。在各自的推荐使用浓度下，过氧乙酸和菌毒消均可在5min内杀灭2种试验菌;月苄三甲氯铵可在5min内杀灭大肠埃希菌，10min内杀灭金黄色葡萄球菌;戊二醛癸甲溴铵可在10min内杀灭大肠埃希菌，15min时对金黄色葡萄球菌的杀灭对数与最大值无显著差异;84消毒液在15min时对2种试验菌的杀灭对数均与最大值无显著性差异，杀菌效果较好。通过对9种消毒剂MIC值、MBC值及杀灭对数值的综合分析筛选出抑菌和杀菌能力均强的月苄三甲氯铵、戊二醛癸甲溴铵、过氧乙酸及菌毒消4种消毒剂进行现场消毒试验，作用30min后过氧乙酸和月苄三甲氯铵对空气中细菌的杀灭率均达90％以上，分别为92.9％、90.6％，戊二醛癸甲溴铵的杀灭率为88.4％，相较之下菌毒消的杀菌率最低，仅80.3％。 综上可得，袋鼠馆的袋鼠舍及饲料间在夏秋季节菌浓度较高，其中灰袋鼠舍的卫生状况最差，应重点关注，且袋鼠舍已受到致病菌株的污染，应注意防控。此外，袋鼠馆常用抗生素中克林霉素已失效，应弃用，常用的9种消毒剂中月苄三甲氯铵、过氧乙酸、戊二醛癸甲溴铵的消毒效果较好，推荐使用。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

绪论

第一章微生物气溶胶的研究进展

1微生物气溶胶概述

1．1微生物气溶胶的概念

1．2微生物气溶胶的来源

1．3微生物气溶胶的特性

2微生物气溶胶的危害

2．1对人类的危害

2．2对畜禽的危害

3微生物气溶胶的检测方法

3．1微生物气溶胶的采集

3．2微生物气溶胶的鉴定

参考文献

第二章化学消毒剂的研究进展

1 化学消毒剂的发展与分类

2常用化学消毒剂的介绍

2．1醛类消毒剂

2．2卤素类消毒剂

2．3氧化剂类消毒剂

2．4季铵盐类消毒剂

2．5酚类、醇类及重金属类消毒剂

3化学消毒剂消毒效果的评价

4影响化学消毒剂消毒效果的因素

4．1消毒剂自身因素的影响

4．2消毒方式的影响

4．3微生物的影响

4．4外界环境的影响

参考文献

第三章袋鼠馆气载需氧菌的初步研究

1材料与方法

1．1材料

1．2方法

2 结果

2．1 赤袋鼠馆气载需氧菌的四季浓度监测结果

2．2灰袋鼠馆气载需氧菌的三季浓度监测结果

2．3分离菌的生化鉴定及16S rRNA比对结果

2．4分离菌的种类与占比

2．5致病菌株筛选结果

2．6致病菌株的抗生素敏感性分析结果

3讨论

参考文献

第四章袋鼠馆常用消毒剂的筛选

1材料与方法

1．1材料

1．2方法

2结果

2．1消毒剂最小抑菌浓度(MIC)测定结果

2．2中和剂的选择验证结果

2．3消毒剂最小杀菌浓度(MBC)测定结果

2．4消毒剂杀菌效果的测定结果

2．5消毒剂的现场消毒结果

3讨论

参考文献

全文总结

致谢