小鼠血清CX43蛋白和丛生蛋白作为辐射生物剂量计的评估

摘要

随着核能、核工业的发展以及恐怖袭击日益复杂的形势下，人们受到核辐射的风险也在逐年增加。在应对突发核辐射事件中，快速、检测方便、高通量的生物剂量计有着极其重要的应用价值，早期生物剂量计也因此成为人们一直以来关注的研究热点。鉴于已有临床生物剂量计难以满足以上要求，各种新的可用于生物剂量计的辐射敏感标志物被研究。生物剂量计在蛋白质层面上的研究近年来被人们重视。本论文研究了急性全身γ照射后小鼠血清中缝隙连接蛋白Connexin43（CX43）以及丛生蛋白Clusterin（CLU）随剂量及时间的变化关系。探究他们作为一种新的能够应对紧急突发核事故的早期生物剂量计的可行性。主要得到以下两个结论：
　　1、利用表面等离激元共振(SPR)生物传感器探测小鼠辐照后血清中CX43蛋白随剂量和时间的变化关系。包覆 CX43抗体的SPR生物传感芯片能够特异性地检测出标准品及样品中的CX43蛋白。在标准品中最低检测限为5ng/L，与采用双抗体夹心技术的ELISA方法相当。用该传感器芯片检测经γ射线照射后小鼠血清样品中的CX43含量随时间的变化关系发现照射后小鼠血清内的CX43蛋白含量随时间呈先升高后降低的趋势，在3h左右达到最高值。检测3h时刻经不同剂量60Coγ射线照射后小鼠的血清样品，结果显示0.6 Gy剂量的γ照射即可引起小鼠血清CX43的高表达。在0～2.4Gy范围内，小鼠血清CX43含量与剂量呈线性关系。Western Blot定性检测结果与SPR一致。而当剂量增加至3Gy时CX43含量开始下降，但仍然明显高于正常对照组。因此在0～2.4Gy区间内，该标识物有望发展成为一种新的早期辐射生物剂量计。
　　2、鉴于目前 SPR生物传感器在通量低、需要反复再生以及其他一些方面的不足和缺陷，本论文利用了另一种免疫分析方法，酶联免疫吸附测定（ELISA）技术研究小鼠血清CLU蛋白作为辐射生物剂量计的可行性探究。利用该技术能够迅速、高通量地检测小鼠辐照后血清中CLU蛋白随剂量和时间的变化关系。标准品检测结果显示，ELISA试剂盒最低检测限为6.25ng/mL。时间效应实验结果发现，照射后小鼠血清中CLU蛋白在起初的2h迅速增加，之后又开始下降。在2 h左右，0～1Gy范围内，CLU蛋白与剂量存在着良好的线性相关关系，而当继续增加剂量后，CLU蛋白含量开始减少。提示CLU蛋白有作为一个良好的早期、低剂量生物剂量计的潜力。

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第一章 绪论

1.1 辐射生物剂量计

1.2 CX43蛋白和CLU蛋白与辐射关系

1.3 表面等离激元共振技术

1.4 酶联免疫吸附测定技术

1.5 免疫印迹法

1.6 本论文主要研究目的及内容

第二章 基于表面等离激元共振技术小鼠CX43生物剂量计探究

2.1前言

2.2 实验仪器及材料

2.3实验方法

2.4 结果与分析

2.5 讨论

2.6本章小结

第三章 基于ELISA技术的小鼠血清丛生蛋白生物剂量计探究

3.1前言

3.2 实验仪器与试剂

3.3 试验方法

3.4 实验结果与分析

3.5 结论

3.6 本章小结

第四章 全文总结与展望

4.1总结

4.2不足与展望

参考文献

致谢

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