胶原蛋白载体制备及在CHO细胞培养中的应用

摘要

动物细胞培养是细胞工程中的重要组成部分,广泛用于单克隆抗体、疫苗、重组蛋白等生物药物的生产,具有广阔的发展前景和市场潜力.开发适合动物细胞培养的载体及其相应反应器,是目前动物细胞培养工程中的重要内容之一.胶原蛋白是一种天然蛋白,具有良好的生物相容性和理化稳定性,在医药、食品等领域中有着广泛的应用.本实验以天然胶原蛋白为原料,采用铬、甲醛、戊二醛改性试剂以及铬-戊二醛、铝-植物单宁复合改性试剂对其进行化学改性处理,继之以湿热灭菌处理改善胶原蛋白理化性质,特别是胶原蛋白的收缩温度和膜通透性,制备动物细胞培养载体.然后,在不同载体上培养CHO细胞,通过载体的贴壁实验、细胞葡萄糖代谢速率以及目的蛋白--促红细胞生长素(Erythropoietin,EPO)浓度对不同培养载体的生物相容性进行评价;对培养过程中细胞代谢的主要参数——葡萄糖代谢速率以及EPO浓度进行监测,通过这两个参数的变化对细胞的生长周期及培养周期进行预测.

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述

1.1动物细胞培养技术基本概念及现状

1.1.1选择动物细胞生产生物制品的原因

1.1.2动物细胞培养的现状及意义

1.2动物细胞培养的关键技术及其研究进展

1.2.1优良的工程细胞株

1.2.2动物细胞大规模培养生物反应器

1.3本课题的引出及其意义

1.3.1新型细胞株的构建

1.3.2新型生物反应器的设计开发

第二章胶原蛋白载体制备

2.1胶原蛋白的结构

2.1.1胶原的多肽序列

2.1.2胶原的超分子聚集

2.2胶原蛋白的改性技术及其机理

2.2.1醛类改性剂作用机理

2.2.2铬改性剂作用机理

2.2.3植-铝结合改性剂作用机理

2.3实验试剂与仪器

2.3.1实验试剂

2.3.2实验仪器

2.4实验方法

2.4.1铬络合物改性

2.4.2甲醛改性

2.4.3戊二醛改性

2.4.4植-铝结合改性

2.4.5戊二醛-铬结合改性

2.4.6改性前后胶原仿生膜的通透性

2.4.7改性前后胶原仿生膜收缩温度的测定

2.5实验结果与讨论

2.5.1铬改性过程有关实验数据

2.5.2甲醛改性相关实验数据

2.5.3戊二醛改性相关实验结果与讨论

2.5.4膜通透性比较

2.5.5膜耐热性能比较

2.5.6电镜照片及表面结构分析

2.6本章小结

第三章动物细胞的载体培养

3.1动物细胞培养主要工艺参数

3.1.1细胞接种密度

3.1.2葡萄糖浓度

3.2实验试剂及仪器

3.2.1实验试剂

3.2.2实验仪器

3.3实验方法

3.3.1HE染色（hematoxylin-eosin,苏木精伊红染色）

3.3.2细胞计数

3.3.3 CHO细胞载体贴壁实验

3.3.4 CHO细胞培养过程葡萄糖浓度变化曲线绘制

3.3.5 CHO细胞培养过程EPO浓度变化曲线绘制

3.3.6培养过程中葡萄糖消耗速率与EPO浓度变化关系

3.4.实验结果与讨论

3.4.1细胞培养的载体贴壁实验

3.4.2载体培养过程中葡萄糖的变化

3.4.3不同载体培养CHO细胞EPO浓度变化

3.4.4不同载体培养过程葡萄糖代谢速率与EPO浓度的对比

3.5本章小结

第四章结论与展望

参考文献

致谢