紫草素对PDGF-BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移影响的实验研究

摘要

目的: 观察紫草素(shikonin)对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(RASMCs)增殖、迁移的影响，探讨其可能机制。 方法: 大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养(植块培养法)，建立RASMCs体外培养模型，取3～8代细胞进行实验。①分为无血清的DMEM，PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L)七组，采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测PDGF-BB诱导下紫草素对细胞增殖的影响；②分为无血清的DMEM，PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0、0.25、0.5、1.0μmol/L)五组，采用台盼蓝拒染计数法测定细胞生长曲线；采用划痕试验法(Pipettetip wounding injury)进行细胞迁移实验；③分为PDGF-BB 0、1、5、10、20、40 ng/mL六组，采用Western Blot法检测RASMCs中HSP-27活性的变化；④分为PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0.25、0.5、1.0μmol/L)组，采用Western Blot法检测各组VSMCs内ERK1/2，P-ERK1/2，P38，P-P38，HSP27，Phospho-HSP27蛋白表达。 结果: ①与对照组(未加药组)相比，0.25～1μmol/L紫草素细胞毒性作用不显著(均P>0.05)；紫草素的浓度增加到2～4μmol/L时，使VSMCs的活性较对照组降低(P<0.05)；②紫草素可呈时间和剂量依赖性地抑制细胞生长，以1μmol/L作用72 h最为显著(2.37×105/孔 vs 5.53×105/孔，P<0.01)；③划痕试验结果表明，细胞经PDGF-BB作用后，迁移活性明显增加，PDGF-BB作用于细胞12h，VSMCs迁移活性是对照组的2.73倍，24h是对照组的3.07倍，均有显著性差异((P<0.01)，紫草素呈时间、剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs的迁移；④PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化，作用峰值浓度为40ng/ml，较对照组增高159.1％(P<0.01)；PDGF-BB(20ng/ml)诱导后VSMCs的HSP27磷酸化水平在30分钟达高峰；⑤紫草素(0.25～1.0umol/L)呈浓度依赖性抑制PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化，在1.0umol/L抑制作用最明显，最大抑制率为56.8％(P<0.01)；⑥体外培养的RASMCs，在PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0.25μmol/L)组的培养液中孵育24h后，P-P38蛋白表达明显下降(P<0.05)；在PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(0.5μmol/L)组及PDGF-BB(20ng/mL)+紫草素(1.0μmol/L)组，P-ERK1/2、P-P38蛋白表达均较PDGF-BB组明显下降((P<0.01)，表明紫草素通过显著抑制ERK/P38MAPK信号通路，下调ERK1/2、P38的磷酸化水平，抑制PDGF-BB诱导RASMC的增殖和迁移。 结论: ①紫草素呈时间、剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs的增殖和迁移；②HSP27的磷酸化可能介导PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs的迁移；③紫草素呈剂量依赖性抑制PDGF-BB诱导的HSP27的磷酸化；④紫草素对PDGF-BB诱导RASMCs增殖和迁移的抑制作用，与抑制ERK/P38MAPK信号通路的活性，下调PDGF-BB诱导的ERK1/2和P38磷酸化水平有关。

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2.方法

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结论

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综述 紫草素及其衍生物抑制细胞增殖、促凋亡作用

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