Smad7反义寡核苷酸在溃疡性结肠炎中的防治作用及其机制的研究

摘要

目的：探讨Smad7反义寡核苷酸在防治溃疡性结肠炎中的作用及其发生机制。 方法： 1.动物模型的建立：将小鼠分为三组，分别为实验组、治疗组和对照组。实验组给予恶唑酮灌肠制作溃疡性结肠炎模型；治疗组联合应用恶唑酮和Smad7反义寡核苷酸灌肠；对照组则正常喂养，不采取任何措施。动物实验结束后处死全部小鼠，取结肠段用10％中性多聚甲醛固定，石蜡包埋，待检；同时留取部分结肠组织-80℃保存。 2.实验研究：(1) 苏木精-伊红(HE)染色，光镜下观察小鼠结肠组织病理形态学变化；(2) 免疫组织化学方法检测用药后Smad7、Smad4、TGF.βR I和TGF-βR II蛋白在结肠细胞中的表达；(3) Western blot法检测Smad7、SmM4、TGF-βR I和TGF-βRII在结肠细胞中的表达水平。 结果： 1.末小鼠一般情况：实验组和治疗组小鼠均于灌肠24h后出现厌食、懒动和稀便；以后，实验组小鼠相继出现便血或者大便隐血阳性(联苯胺法)，治疗组小鼠则无便血，偶有大便隐血阳性；两组小鼠均有体重下降，但实验组小鼠体重下降更明显，与治疗组相比差异显著(p<0.05)；对照组小鼠则无任何异常反应，体重增加。 2.小鼠结肠粘膜大体形态观察：对照组小鼠结肠黏膜无水肿、糜烂及溃疡形成，偶见远端黏膜轻度充血，平均评分值为0.167±0.408；实验组小鼠远端结肠黏膜明显充血水肿，可见较多小溃疡，病变连续存在，平均评分值为3.667±0816，与对照组比较差异显著(p<0.05)；治疗组小鼠远端结肠黏膜亦有充血水肿，程度较轻，溃疡较少且面积较小，平均评分值为1.000±1.095，与实验组相比评分下降，差异有统计学意义(p<0.05)。 3.免疫组织化学方法染色结果显示，小鼠结肠粘膜组织中实验组Smad7的阳性表达增加，阳性率为81.0±4.64％，与对照组(15.7±5.68％)相比差异有统计学意义(p<0.05)，治疗组的阳性表达(37.7±4.52％)与实验组相比明显减少(p<0.05)；而Smad4、TGF-βRⅡ的阳性表达在实验组减少，阳性率分别为32.7±4.37％、30.4±4.01％，与对照组比较差异同样有统计学意义(p<0.05)，在治疗组中两者的表达增加，分别为42.8±4.95％、47.1±4.10％，与实验组比较差异显著(p<0.05)。 4.Western blot检测：在实验组小鼠结肠组织中Smad7的表达量为4.96±0.67，显著高于对照组(2.68±1.28)，两组比较差异有统计学意义(p<0.05)，而治疗组的表达量为2.77±0.96，显著低于实验组(p<0.05)；Smad4在实验组的表达量为0.96±0.14，显著低于对照组(1.18±0.17)，差异有统计学意义(p<0.05)，在治疗组中表达量为1.39±0.19，显著高于实验组(p<0.05)；TGF-βRⅡ在实验组的表达量为0.65±0.15，显著低于对照组(0.95±0.06)，差异有统计学意义(p<0.05)，在治疗组中TGF-βRⅡ的表达增加(1.10±0.14)，与实验组比较显著上调(p<0.05)；TGF-βRⅠ在对照组中的表达量为0.73±0.38，实验组和治疗组中的表达量分别为1.17±0.25，和0.80±0.13，三组相比差异均无统计学意义(p>0.05)。 结论： 1.应用恶唑酮成功制作了小鼠UC模型。 2.Smad7反义寡核苷酸能有效防治恶唑酮诱发的UC，为其进一步用于UC的防治提供了理论依据。 3.UC小鼠结肠组织中存在TGF-βRⅠ/Ⅱ的表达异常，且给予Smad7反义寡核苷酸干预后可有效预防UC的发生并能逆转TGF-βRⅠ/Ⅱ的表达异常，提示TGF-β-TGF-βR-Smads通路为UC发生的重要途径。 4.Smad7反义寡核苷酸能减少恶唑酮诱发的UC小鼠结肠粘膜组织中Smad4的表达，推测其有可能减少UC癌变的发生率。

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综述 食物纤维对炎症性肠病和结肠癌的影响

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