短程小剂量甲氨喋呤防治急性移植物抗宿主病的动物实验研究

摘要

目的: 探讨短程小剂量MTX对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的防治作用。 第一部分 MTX不同给药次数对小鼠allo-BMT后aGVHD的预防作用 方法: 雌性BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠，雄性C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠，建立aGVHD模型。受鼠随机分成6组，每组10只。具体分组如下：A组为单纯照射组；B组单纯移植组，不用aGVHD预防药物；C组单用CSA预防组(CsA5mg·kg-1·d-1腹腔注射，+1d开始用药，当小鼠胃肠功能恢复后改为5mg·kg·-1·d-1灌胃)；D组为两次MTX(10mg/m2腹腔注射，+1d、+3d用药)联合CSA(用法及剂量同C组)预防组；E组为三次MTX(10mg/m2腹腔注射，+1d、+3d、+6d用药)联合CSA预防组；F组四次MTX(10mg/m2腹腔注射，+1d、+3d、+6d、+11d用药)联合CSA预防组。比较各组受鼠aGVHD的发生情况，生存期、病理变化、造血重建及其嵌合状态。 结果: (1) 各移植组受鼠aGVHD的发生率：B组单纯移植组、C组单用CSA预防组和D组两次MTX联合CSA组小鼠aGVHD发生率100％，30天内均死于aGVHD。E组三次MTX联合CSA预防组、F组四次MTX联合CSA预防组aGVHD的发生率低于B、C、D各组(P<0.05)，E组、F组aGVHD的发生率分别是40％和30％(P>0.05)。 (2) 各移植组受鼠临床及病理GVHD评分：B组评分明显高于C、D、E、F各组(P<0.05)，C组高于D、E、F组(P<0.05)，D组高于E、F组(P<0.05)，E组和F组无差异(P>0.05)。 (3) 各移植组受鼠生存情况：E组、F组30天生存率高于B、C、D各组(P<0.05)，E组、F组30天生存率分别为50％和60％(P>0.05)。 (4) 各移植组受鼠白细胞恢复时间：B组单纯移植组白细胞恢复至>1×109/L的时间依次短于C组单用CSA预防组、D组CSA联合两次MTX组、E组CSA联合三次MTX组、F组CSA联合四次MTX组(P<0.05)；F组白细胞恢复时间最长，与C组、D组、E组相比有统计学差异(P<0.05)。 (5) 各组移植受鼠嵌合状态：骨髓移植后30d，应用流式细胞仪检测存活受鼠的异基因嵌合率均达95％～100％。 第二部分 MTX不同剂量、不同时间点对小鼠allo-BMT后aGVHD的治疗作用 方法: 将发生轻至中度aGVHD受鼠随机分为对照组(A组未用MTX治疗组)和实验组(MTX不同剂量组和不同时间点组)。(1) MTX不同剂量组分三组(各组受鼠在发生aGVHD后即刻给以不同剂量的MTX治疗，每周一次，共四周)：B组MTX 10mg/m2；C组MTX 7.5mg/m2；D组MTX 5mg/m2。(2) MTX不同时间点组分三组(各组受鼠在发生aGVHD后的不同时间点均予以MTX10mg/m2治疗，每周一次，共四周)：E组(0h)予以治疗；F组(24h)后予以治疗：G组(48h)后予以治疗。分析各组受鼠aGVHD治疗有效率及白细胞计数的变化。 结果: (1) MTX不同剂量组：B组MTX 10mg/m2即刻给药组总的有效率(100％)高于C组7.5mg/m2(50％)、D组5mg/m2(0％)(P<0.05)，C组有效率高于D组(P<0.05)。 (2) MTX不同时间点组：E组(0h)予以MTX治疗组总的有效率(100％)高于F组(24h)后治疗组(50％)及G组(48h)后治疗组(0％)(P<0.05)，F组总有效率又高于G组(P<0.05)。 (3) 治疗时各组小鼠外周血白细胞基本恢复至>1×109/L，用药后各组小鼠白细胞无明显下降，未发现MTX的相关感染。 结论: (1)三次剂量和四次剂量MTX联合CSA方案能有效的预防小鼠allo-BMT后的aGVHD，与单用CSA预防组或MTX两次剂量组相比aGVHD发生率降低，aGVHD的严重程度减轻，生存期延长(P<0.05)。MTX三次、四次剂量预防aGVHD的疗效无明显差异(P>0.05)；而三次剂量方案造血恢复较快(P<0.05)，是预防aGVHD较为优化的方案。 (2) 短程小剂量MTX单药可以安全有效的治疗allo-BMT后的小鼠轻至中度aGVHD，发生aGVHD后立即启用MTX效果较佳，并存在着一定的量效关系。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分 MTX不同给药次数对小鼠allo-BMT后aGVHD的预防作用

材料和方法

结果

第二部分 MTX不同剂量、不是时间点对allo-BMT后aGVHD的治疗作用

材料和方法

结果

讨论

结论

实验图表

参考文献

综述：角质细胞生长因子生物学特性及其在造血干细胞移植中对移植物抗宿主病的防治作用

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

致谢