苯扎贝特对血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖和小凹蛋白-1表达的影响

摘要

目的：人工体外培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs),观察过氧化物酶增生物激活受体α(PPARα)的配体苯扎贝特对血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导的VSMCs的增殖及小凹蛋白-1(caveolin-1)表达的影响并探讨其相应的机制。
　　 方法：植块贴壁法常规分离和培养250-300g SD大鼠的胸主动脉VSMCs,光学倒置显微镜下观察细胞形态学,SM-α-actin单克隆抗体和免疫组织化学染色鉴定培养的平滑肌细胞。细胞毒性实验采用台盼蓝染色和细胞计数的方法观察终浓度为50～200μmol/L的苯扎贝特对VSMCs的毒性反应。选择生长良好的第3-5代细胞用于实验。实验分为5组:①对照组:加入DMSO:②PDGF组:培养基中加入终浓度为20μg/L的PDGF-BB孵育24h;③低浓度苯扎贝特+PDGF组:培养基中加入终浓度为50μmol/L的苯扎贝特预处理2h后,其余处理同PDGF组;④中浓度苯扎贝特+PDGF组:苯扎贝特终浓度为100μmol/L,其余处理同PDGF组;⑤高浓度苯扎贝特+PDGF组:苯扎贝特终浓度为200μmol/L,其余处理同PDGF组。采用噻唑兰比色法检测各组VSMCs的增殖活性,在490nm波长下用全自动酶标仪测定各孔的吸光度(OD)值。用Wester-blot方法分别测定各组caveolin-1蛋白的表达,在NBT/BCIP显色液下显色,显示条带,并通过Image J软件进行密度分析,得出灰度值。
　　 结果： VSMCs鉴定:正常平滑肌细胞生长良好,光学倒置显微镜下观察细胞呈长条索形、菱形,细胞核清晰,细胞边界清楚,胞浆丰富,未见空泡。SM-α-actin单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定培养细胞低倍镜下可见细胞胞浆普遍被染成黄褐色,呈阳性反应;高倍镜下可见细胞胞浆内均匀分布SM-α-actin,表明培养所得细胞确实为VSMCs。细胞毒性实验:50～200μmol/L浓度的苯扎贝特对VSMCs生长无毒性反应,VSMCs存活率达95％以上。细胞增殖的检测:噻唑兰比色法检测结果显示PDGF组的24h OD值(0.487±0.019)较对照组(0.319±0.009)明显升高,PDGF-BB能显著诱导VSMCs增殖;低、中、高浓度苯扎贝特+PDGF组的24h OD值(0.308±0.012,0.224±0.011,0.146±0.013)均较PDGF组(0.487±0.019)明显降低,有统计学意义,不同浓度苯扎贝特对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖均有一定的抑制作用,且随浓度增加,其抑制作用增强。Western blot检测:PDGF组的caveolin-1蛋白条带灰度值(3446.57±25.58)较正常对照组(6748.13±19.10)明显降低,有统计学意义,caveolin-1蛋白表达较对照组明显降低;低、中、高浓度苯扎贝特+PDGF组的caveolin-1蛋白条带灰度值(5735.27±21.35,10854.61±35.02,16085.12±49.52)均较PDGF组(3446.57±25.58)明显升高,有统计学意义,不同浓度的苯扎贝特干预后caveolin-1蛋白表达较PDGF组明显升高,且随苯扎贝特浓度增加,caveolin-1蛋白表达也逐渐增加。
　　 结论：
　　 1.苯扎贝特对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖具有一定的抑制作用,且随浓度增加,其抑制作用增强。
　　 2.苯扎贝特可以增加VSMCs的caveolin-1蛋白表达,其表达强度随苯扎贝特的浓度增加而增强。
　　 3.苯扎贝特上调VSMCs的caveolin-1蛋白表达,是其发挥抑制VSMCs增殖作用的可能机制。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

前言

材料和方法

1.材料

2.方法

结果

讨论

结论

论文图片

参考文献

综述:过氧化物酶体增殖物激活受体与血管平滑肌细胞增殖的研究进展

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

临床培训小结

致谢