IL-18在大鼠抗肾小球基底膜肾炎细胞凋亡中的研究

摘要

目的: 成功复制大鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎模型，探讨白细胞介素18(Interleukin-18，IL-18)在大鼠抗肾小球基底膜肾炎细胞凋亡中的作用，为进一步阐明人类新月体性肾炎的致病机制提供理论基础。
　　 方法: 复制大鼠抗GBM肾炎模型。实验随机分为两组：肾炎模型组大鼠一次性尾静脉注射兔抗大鼠GBM血清；正常对照组大鼠尾静脉注射等量正常兔血清。肾炎模型组于实验前一周足垫皮内注射正常兔血清进行预免疫。分别于实验第2d、7d、14d、21d和28d，行以下处理：收集24h尿、血清样本检测大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量；取肾组织经光镜观察肾组织病理变化；采用TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况；采用免疫组织化学、RT-PCR和Western blot法分别检测肾组织中IL-18、Fas、FasL mRNA和蛋白表达情况；运用RT-PCR和分光光度法检测肾组织中caspase-3 mRNA表达情况和蛋白活性。
　　 结果:
　　 1．与正常对照组相比，肾炎模型组大鼠尾静脉注射兔抗大鼠GBM血清后，24h尿蛋白含量第2d开始升高，第14d达到高峰，第21d有所下降，但仍较正常对照组高(均P<0.01)；血肌酐和血尿素氮含量于第2d开始升高，并随着病程的延长持续上升(均P<0.01)。
　　 2．光镜观察到肾小球内细胞数于免疫后第2d轻微增多，至第7d继续增多，并于第14d明显增多，可见细胞性新月体形成，肾小管内大量蛋白管型，肾小管上皮细胞肿胀，间质可见大量炎性细胞浸润，第21d和第28d肾小球内细胞数有所下降，部分肾小球纤维化。
　　 3．TUNEL法观察到肾炎模型组大鼠肾小球内凋亡细胞于第2d开始升高，第14d达高峰，此后有所减少，但仍维持较高水平，与正常对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。
　　 4．肾炎模型组大鼠肾组织IL-18 mRNA和蛋白表达于第2d开始升高，第14d达峰值，第21d有下降趋势，但仍高于正常对照组(均P<0.01)。
　　 5．肾炎模型组大鼠肾组织中Fas、FasL mRNA和蛋白表达均于第2d开始升高，第14d达峰值，第21d有下降趋势，但仍高于正常对照组(均P<0.01)。
　　 6．肾炎模型组大鼠肾组织中caspase-3 mRNA表达和其蛋白活性均于第2d开始升高，第21d达峰值，第28d有下降趋势，但仍高于正常对照组(均P<0.01)。7．相关分析显示肾炎模型组大鼠肾组织IL-18与24h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、Fas、FasL、caspase-3 及肾小球内凋亡细胞数均呈正相关(P<0.05)。
　　 结论: IL-18通过激活死亡受体信号通路诱导的细胞凋亡参与了大鼠抗GBM肾炎的发病机制。