重组人P53腺病毒对人结肠癌和胃癌细胞的影响及其化疗的增敏作用

摘要

目的:观察重组人p53腺病毒感染人结肠癌细胞及不同分化程度的胃癌细胞后,外源性p53基因在肿瘤细胞内的表达,对肿瘤细胞的增殖抑制及化疗敏感性的影响;探讨重组人p53腺病毒注射液(rAd-p53)抗肿瘤及化疗增敏作用的机制。
　　 方法:
　　 1、不同浓度的rAd-p53及OXA单独或联合作用于结肠癌细胞后,CCK-8法测定细胞生长抑制率;免疫组化染色(S-P)检测p53蛋白、凋亡蛋白bax、bcl-2在肿瘤细胞中的表达;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率及凋亡蛋白Caspase-3的表达。
　　 2、不同浓度的rAd-p53及OXA单独或联合作用于不同分化程度的胃癌细胞后,MTT法测定细胞的生长抑制率;S-P检测p53蛋白、凋亡蛋白bax、bcl-2在结肠癌、胃癌细胞中的表达;FCM检测细胞凋亡率及凋亡蛋白Caspase-3的表达。
　　 结果:
　　 一.MTT及CCK-8法检测结果
　　 1.不同浓度rAd-p53、OXA单药及联合作用对结肠癌细胞SW1116生长的影响
　　 不同浓度rAd-p53、OXA单药及联合作用24h后,结肠癌细胞的生长即产生明显抑制作用,随着药物浓度的增加及作用时间的延长,结肠癌细胞的生长抑制作用逐渐增强,且两药联合作用对细胞生长的抑制作用明显高于单药。
　　 2.不同浓度rAd-p53、OXA单药及联合作用对不同分化程度的胃癌细胞SGC-7901(中分化)、BGC-823(低分化)、HGC-27(未分化)生长的影响
　　 随着药物浓度的增加及作用时间的延长,对肿瘤细胞生长的抑制作用逐渐增强,且两药联合作用对细胞的抑制作用明显高于单药,同时细胞分化程度越高,其药物作用后的生长抑制作用越明显,即:SGC-7901＞BGC-823＞HGC-27。
　　 二.免疫组织化学法检测结果显示
　　 1.rAd-p53作用于肿瘤细胞后,p53蛋白阳性表达于细胞核内,p53蛋白的阳性表达率较对照组显著增高(P＜0.05),且随着rAd-p53浓度的增加而上升,但OXA浓度对p53蛋白的表达无影响(P＞0.05)。
　　 2.不同浓度rAd-p53、OXA单药及联合作用于肿瘤细胞后,均可下调bcl-2、上调bax蛋白的表达(P＜0.05),且随着药物浓度的增加,其上调bax或下调bcl-2的作用越显著。
　　 三.FCM检测结果显示
　　 1.不同浓度rAd-p53、OXA单药及联合作用于肿瘤细胞后,与对照组相比,细胞凋亡率显著增高(P＜0.05)。
　　 2.药物作用于肿瘤细胞后,凋亡蛋白Caspase-3表达水平明显高于对照组(P＜0.05),且随着药物浓度的增加,Caspase-3蛋白的表达逐渐增加。提示Caspase-3可能参与了细胞凋亡过程。
　　 结论:
　　 1.rAd-p53能够有效抑制人结肠癌(SW1116)及胃癌细胞(SGC-7901、BGC-823、HGC-27)的生长并诱导其凋亡,且随药物浓度及作用时间的增加,对细胞的生长抑制作用明显增强。
　　 2.rAd-p53可增加肿瘤细胞的化疗敏感性,其机制与下调bcl-2、上调bax、激活Caspase-3有关,从而诱导细胞凋亡,为基因治疗与化疗的结合提供了依据。
　　 3.胃癌细胞分化程度越高,对rAd-p53、OXA的反应越敏感,为上述药物的使用提供了一定的依据。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

前言

材料和方法

1.材料

2.方法

结果

讨论

结论

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参考文献

综述:p53基因治疗及其在消化道肿瘤中的应用进展

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

临床培训小结

致谢