BRG1基因在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及分子机制研究

摘要

目的：体外研究BRG1基因对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。
　　方法：siRNA技术降低乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549中BRG1蛋白表达水平，并用Western Blot验证干涉效果；用CCK-8细胞增殖实验分析BRG1基因对两种乳腺癌细胞增殖能力的影响；利用流式细胞分析技术研究BRG1基因在两种乳腺癌细胞周期进展中的作用，并利用Western Blot研究BRG1对多种细胞周期蛋白(CDK)及细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKIs)的影响；利用Transwell细胞迁移及侵袭实验分析BRG1基因对两种细胞株迁移及侵袭能力的影响；并利用明胶酶谱实验分析两种乳腺癌细胞分泌至胞外的基质金属蛋白酶(MMPs)的变化情况，利用Western Blot检测MMPs及基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)蛋白表达水平的变化情况。
　　结果：siRNA技术能明显降低MDA-MB-231和BT-549两种乳腺癌细胞BRG1基因的表达；CCK-8细胞增殖实验结果显示，BRG1基因干涉后明显抑制两种乳腺癌细胞的增殖能力；流式细胞分析技术及Western Blot实验结果显示BRG1通过调节Cyclin E、Cyclin E2、Cyclin B1和p27的蛋白表达参与细胞周期调控；Transwell细胞迁移及侵袭实验结果显示，BRG1表达降低后明显抑制两种乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力；Western Blot及明胶酶谱实验显示BRG1通过上调MMP-9和MMP-2的活性水平和下调TIMP1和TIMP2表达水平来促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。
　　结论：BRG1基因表达降低通过下调Cyclin E、Cyclin E2、Cyclin B1蛋白的表达，同时上调p27蛋白的表达，而使MDA-MB-231和BT-549两种乳腺癌细胞均停滞在G1期，最终抑制两种乳腺癌细胞的增殖能力。BRG1基因表达降低通上调TIMP2和TIMP1的表达抑制相应的基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达，下调MMP-2和MMP-9的酶活性水平，发挥抑制两种乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力的作用。