环孢素A联合钴原卟啉防治小鼠移植物抗宿主病的研究

摘要

目的：研究环孢素A(CsA)联合钴原卟啉(CoPP)防治异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)的作用。
　　方法：以C57BL/6小鼠为供鼠，BALB/c小鼠为受鼠，随机分四组，分别为清髓照射对照组(TBI组，n=30)：60Co照射后4小时内，尾静脉注射0.3 ml PBS；常规异基因移植组(BS组，n=30)：TBI后，尾静脉注射0.3ml骨髓细胞(BM)与脾细胞(SP)混合悬液；CsA干预组(CsA组，n=30)：常规异基因移植后腹腔注射CsA；CsA联合CoPP干预组(联合组，n=30)：常规异基因移植后腹腔注射CsA和CoPP。移植后观察受鼠一般状况，定期称量体重，记录小鼠的生存时间并统计生存率，移植后5d、10d、15d、20d和30d，取受鼠外周血流式细胞术分析外周血T细胞亚群，全自动生化分析仪检测肌酐、尿素氮和尿酸浓度变化，获取受鼠肝脏、小肠、皮肤标本，观察GVHD病理变化，行Masson染色观察肾间质纤维化情况。荧光定量PCR检测移植后15d受鼠肾血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA表达水平。
　　结果：1.移植后受鼠GVHD发生情况：与BS组和CsA组比较，联合组移植后生存率较高(P<0.05)，体重下降较少且恢复较快(P<0.05)，GVHD临床评分较低(P<0.05)，GVHD靶器官肝脏、小肠、皮肤病理损伤程度均较轻，病理评分均较低(P<0.05)，CD8+T细胞比例较低。2.钴原卟啉可减轻CsA所致肾毒性：Masson染色可见，CsA组小鼠肾间质小管纤维化移植后逐渐加重，评分呈逐渐增高趋势，而联合组肾间质小管纤维化少有发生，评分明显低于CsA组(P<0.05)；CsA组小鼠移植后肌酐、尿素氮、尿酸均呈现开始逐渐增高后渐达稳定趋势，而联合组肌酐、尿素氮、尿酸浓度无明显增高趋势，明显低于CsA组(P<0.05)。3。CsA可下调受鼠肾HO-1 mRNA表达，而钴原卟啉可逆转这一效应：移植后15d受鼠肾HO-1 mRNA荧光定量PCR显示，CsA组HO-1 mRNA的表达量较BS组下降，而联合组HO-1 mRNA的表达量明显上调(P<0.05)。
　　结论：1.在小鼠GVHD模型中，CoPP可增强CsA的抗GVHD效应。2.CoPP可减轻CsA所致肾毒性作用。3.CoPP减轻CsA所致肾毒性的机制可能与CoPP上调HO-1表达有关。