阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70载AT1受体反义寡核苷酸对自发性高血压大鼠心室重构的影响

摘要

目的：采用阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70作为运载系统，以SHR为研究对象，探讨MPC30-DEA70能否有效地负载针对自发性高血压大鼠AT1受体基因的AS-ODN(AT1-RAS-ODN)及对SHR心室重构及血压的影响。
　　方法：1.应用原子转移自由基聚合(atom transfer radicalpolymerization，ATRP)法合成具有高度生物相容性的MPC30-DEA70；2-转染7天后取心肌组织做快速冰冻切片，应用荧光显微镜(FM)观察MPC30-DEA70和MPC30-DEA70/FAM-AS-ODN在心肌内的转染情况；3.用SHR作为实验动物模型，采用心肌内直接注射的方式转染MPC30-DEA70/AT1-R AS-ODN(按N/P比值20:2，30:2)4周，并设立WKY大鼠正常对照。通过如下方法评价复合物对大鼠心室重构及血压的影响：①采用无创尾套法测定治疗前后大鼠的血压；②测左心重/体重比重评价大鼠的心室肥厚程度；③HE染色检测左心室肌病理变化；天狼猩红-苦味酸染色检测左心室肌胶原沉积；④western blot法检测MPC30-DEA70/AT1-RAS-ODN对SHR中AT1-R、p38MAPK蛋白表达的影响；RT-PCR检测MPC30-DEA70/AT1-R AS-ODN对AT1-R mRNA表达的影响。
　　结果：1.FM下观察可见MPC30-DEA70(FAM标记)能够安全、有效地转入心脏组织，剂量大时呈现一定的毒性。2.袖套尾动脉测压法发现干预治疗4周后，SHR组、N/P=30:0组、N/P=0:2组、N/P=20:2组、N/P=30:2组比较各组间SBP无统计学差异(P>0.05)；组内比较，随着时间的延长，4W的血压明显高于同组内0W的血压(P<0.05)。3.MPC30-DEA70/AT1-RAS-ODN对SHR心室重构的影响：SHR组大鼠有明显的心室重构现象。与正常组WKY相比，模型组大鼠HMI增高(P<0.05)；经治疗4周后，与SHR组比较，N/P=20:2组、N/P=30:2治疗组能降低大鼠心肌肥厚指标(P<0.05)；4.病理观察：与正常WKY组比较，SHR组心肌组织形态及心肌细胞超微结构严重受损，光镜下可见心肌细胞明显浊肿，空泡样变化；细胞核肥大或固缩；细胞内容物成颗粒状，断裂融合，天狼星染色可见模型组SHR大鼠心肌胶原分柿较多，N/P=20:2组、N/P=30:2治疗组能改善SHR组上述病理改变及心肌细胞超微结构。5.Westernbolt法检测到应用MPC30-DEA70转染AT1-R AS-ODN后AT1-R、p38MAPK蛋白表达下降(P<0.05)；RT-PCR检测示MPC30-DEA70转染AT1-R AS-ODN后可导致AT1-R mRNA表达下降且随N/P比值增加下降明显(P<0.05)。
　　结论：阳离子磷酸胆碱聚合物可以有效负载和运输AT1受体反义寡核苷酸，抑制AT1受体表达，并能改善心室重构，是一种高效安全的非病毒类转基因载体。