结缔组织生长因子基因沉默对裸鼠模型瘢痕疙瘩中胶原代谢的影响

摘要

目的：在前期细胞学实验基础上，利用CTGFsiRNA重组质粒特异性沉默裸鼠模型瘢痕疙瘩中结缔组织生长因子，观察分析转染后标本中CTGF、Ⅰ型胶原代谢变化及二者之间有无相关性，反向说明CTGF基因对瘢痕疙瘩生成的意义，为瘢痕疙瘩的基因治疗提供依据。
　　方法：1.取临床上未经治疗的瘢痕疙瘩小组织块（8×8×5mm3）植入裸鼠皮下，携带一段时间（16天）后，取出标本进行各种染色后光镜下分析比较标本植入前后变化，检测模型成功与否。2.将细胞学实验部分构建特异性沉默CTGFmRNA片段的质粒，导入DH5α菌中，扩增足够剂量质粒，以脂质体为载体，待体内转染。3.按照比例混合CTGFsiRNA重组质粒与脂质体，在动物模型成功构建第16天注入实验组瘢痕标本内，阴性组、脂质体组及空白组标本分别在同时间注射等量非特异性重组质粒与脂质体混合液、脂质体液及PBS液，质粒注射第7天获取标本。4.逆转录聚合酶链反应方法检验转染后CTGFmRNA及COL-1 mRNA表达的效果;免疫组织化学方法检测转染后，阻碍内源性TGF-β/CTGF信号转导条件下标本中CTGF及COL-1的表达情况。5.采取裸鼠血液检测转染对动物模型有无毒副作用。
　　结果：1.裸鼠动物模型构建成功，标本植入前后瘢痕疙瘩标本成分无明显变化。2.实验组CTGFmRNA及蛋白表达量均显著降低(P＜0.05)，体内转染可显著抑制CTGF表达;实验组Ⅰ型胶原mRNA及蛋白表达量显著降低(P＜0.05)，且Ⅰ型胶原与CTGF的表达量呈正相关(r=0.979，P＜0.05)。3.质粒对裸鼠无明显毒副作用。
　　结论：通过RNAi技术，体内环境下抑制CTGF基因表达后，瘢痕疙瘩中胶原蛋白的合成均能得到明显抑制。瘢痕疙瘩体内基因干预实验的成功不仅明确了CTGF基因具有促进瘢痕疙瘩增生的特性，也为抑制瘢痕疙瘩增生提供了新的靶点，并为瘢痕疙瘩的基因治疗方面的进一步研究做铺垫。

目录

研究生个人简介

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摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 病理性瘢痕动物模型的研究进展

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

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