RUNX3基因在前列腺癌细胞迁移、侵袭和血管生成中的作用及分子机制研究

摘要

目的：体外研究RUNX3基因对前列腺癌细胞迁移、侵袭和促进血管生成能力的影响及其具体分子作用机制。
　　方法：利用组织芯片免疫组化技术观察RUNX3在癌旁正常前列腺组织和前列腺癌组织中的表达;用RUNX3的真核表达载体pFlag-control和pFlag-RUNX3转染前列腺癌细胞系DU145和PC-3，Western Blot实验观察表达效果;CCK-8细胞增殖实验检测RUNX3基因表达后对DU145和PC-3两种前列腺癌细胞增殖的影响;Transwell细胞迁移实验及侵袭实验观察RUNX3基因表达后对DU145和PC-3两种前列腺癌细胞迁移能力和侵袭能力的影响;明胶酶谱实验检测RUNX3基因表达后对两种前列腺癌细胞分泌活性MMPs的影响;利用Western Blot观察RUNX3基因表达后对两种前列腺癌细胞中MMPs及TIMPs蛋白表达的影响;ELISA检测VEGF在转染细胞培养上清中的水平;小管形成实验观察转染细胞培养上清对诱导HUVECs（人脐静脉内皮细胞）小管形成的影响以及对HUVECs细胞增值的影响。
　　结果：组织芯片免疫组化实验显示:与癌旁正常前列腺组织相比较RUNX3在前列腺癌组织中表达下降(P＜0.05)，且与低分级癌组织相比，高分级癌组织中RUNX3在前列腺癌组织中表达下降(P＜0.05);RUNX3真核表达载体转染后DU145和PC-3两种前列腺癌细胞中RUNX3表达量明显升高;CCK-8细胞增殖实验结果显示:在前列腺癌细胞DU145和PC-3中转染RUNX3真核表达载体后对照组和转染RUNX3真核表达载体组细胞增殖率差异无统计学意义;RUNX3基因表达升高后DU145细胞的迁移和侵袭能力与对照组相比分别减少57％和82％，与对照组比较，差异有统计学意义（两种细胞中均P＜0.05），PC-3细胞的迁移和侵袭能力与对照组相比分别减少55％和63％，差异有统计学意义(两种细胞中均P＜0.05);明胶酶谱实验显示:RUNX3基因表达升高后DU145和PC-3两种前列腺癌细胞中MMP-2的活性与对照组相比分别减少了58％和39％，差异有统计学意义（两种细胞中均P＜0.05）;Western Blot实验显示:在前列腺癌细胞DU145和PC-3中转染RUNX3后基质金属蛋白酶MMP-2表达水平较对照组分别下降了39％和13％（两种细胞中均P＜0.05），基质金属蛋白酶MMP-2的抑制剂TIMP-2表达水平较对照组分别增加了43％和71％（两种细胞中均P＜0.05）;ELISA发现RUNX3可以抑制前列腺癌细胞培养上清中VEGF的表达水平;小管形成实验结果显示:与对照组相比，两种前列腺癌细胞DU145和PC-3转染RUNX3后的培养上清均可抑制HUVECs的增值（两种细胞中均P＜0.05）以及减少HUVECs的小管样结构形成数（两种细胞中均P＜0.05）。
　　结论： RUNX3在前列腺癌组织尤其在高分期癌组织中表达下调，RUNX3表达升高后通过上调TMP-2的表达，抑制VEGF的表达，最终抑制了前列腺癌细胞在体外的迁移和侵袭以及促进血管形成的能力。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

RUNX3基因在癌症中的研究进展 综述

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

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