NR1/NR2B型NMDA受体和CaMKⅡ在模型大鼠阿尔茨海默病发生机制中的作用

摘要

目的：研究NR1/NR2B型NMDA受体和CaMKⅡ在阿尔茨海默病(Alzheimercsdisease，AD)样大鼠海马的表达及其与AD样大鼠海马神经细胞损伤的关系。为临床AD的预防和治疗以及研制和开发针对NR1/NR2B型NMDA受体和CaMKⅡ的特异性新药提供理论基础、实验依据和新的靶点。
　　方法：健康成年雄性SD大鼠随机分为AD模型组、NS对照组和正常对照组。AD模型组大鼠侧脑室双侧单次给予1mg/mlAβ1-4030μl，5d后以100mg/kg/d隔天腹腔注射3％AlCl3持续4周，NS对照组给予相同剂量生理盐水。采用Morris水迷宫方法测试各组大鼠的逃避潜伏期；采用HE染色和TUNEL染色的方法检测大鼠海马神经细胞的损伤和凋亡情况；采用免疫印迹的方法检测大鼠海马NR1、NR2B和CaMKⅡ的表达情况。然后，以CaMKⅡ反义寡核苷酸侧脑室给药(双侧、每侧5μl、一次性给药)的方式来研究CaMKⅡ和NR1/NR2B型NMDA受体在AD样大鼠海马细胞损伤中的作用。实验分为AD模型组、溶剂对照组、反义寡核苷酸组和错义寡核苷酸组。溶剂对照组和错义寡核苷酸组分别给予相刚剂量的溶剂(TE缓冲液)和CaMKⅡ错义寡核苷酸。采用Morris水迷宫的方法来检测各组大鼠的逃避潜伏期，采用HE染色和TUNEL染色法检测大鼠海马细胞的损伤和凋亡情况，并采用免疫印迹的方法检测NR1、NR2B和CaMKⅡ在大鼠海马的表达变化情况。结果采用SPSS16.0统计软件进行分析，数据以均数±标准差(means±SD)表示，组间比较采用单因素方差分析，多个实验组和一个对照组比较采用最小显著差法。p<0.05表示差异有统计学意义。
　　结果：1.Morris水迷宫实验显示，AD模型组大鼠逃避潜伏期明显延长，与正常对照组及NS对照组相比，差异有统汁学意义(p<0.05)。2.AD模型大鼠海马CA1区、CA3区和DG区细胞均发生明显损伤，与正常对照组和NS对照组相比，差异有统计学意义(p<0.05)。3.AD模型大鼠海马凋亡阳性细胞在CA1区、CA3区和DG区均显著升高，与正常组和NS对照组相比，差异有统计学意义(p<0.05)。4.AD模型大鼠海马NR1、NR2B和CaMKⅡ的表达均升高，与正常组和NS对照组相比，差异有统计学意义(p<0.05)。5.Morris水迷宫测试显示，CaMKⅡ反义寡核苷酸组大鼠逃避潜伏期明显缩短，与模型组、溶剂对照组和错义组相比，差异有统汁学意义(p<0.05)。6.与模型组、溶剂对照组和错义组相比，侧脑室注射CaMKⅡ反义寡核苷酸的模型大鼠海马细胞在CA1区、CA3区和DG区损伤和凋亡减轻，差异有统计学意义(p<0.05)。7.与模型组、溶剂对照组和错义组相比，侧脑室注射CaMKⅡ反义寡核苷酸的模型大鼠海马NR1、NR2B和CaMKⅡ的表达减少，差异有统计学意义(p<0.05)。
　　结论：1.采用Aβ1-40和AlCl3双干预的方法，能够成功复制AD样大鼠模型。2。在AD模型大鼠行为学缺失和海马细胞损伤的同时，NR1、NR2B和CaMKⅡ的表达均显著增高。3.CaMKⅡ反义寡核苷酸能够明显减轻AD模型大鼠海马细胞的损伤、改善AD模型大鼠行为学的缺失，同时能够降低NR1、NR2B和CaMKⅡ的表达。4.NR1/NR2B型NMDA受体和CaMKⅡ，尤其是后者在模型大鼠阿尔茨海默病的发生机制中可能发挥重要作用。