丹参酚酸A对AngⅡ诱导的巨噬细胞产生抗氧化、抗凋亡和抗炎的作用及其机制研究

摘要

目的：本实验旨在观察丹参酚酸A(SAA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞产生抗氧化、抗凋亡和抗炎作用，并对其作用机制进行初步探讨，研究SAA在抗动脉粥样硬化方面的作用，为今后SAA临床应用治疗动脉粥样硬化性疾病提供理论和实验依据。
　　方法：1.本实验所用昆明小鼠均购自徐州医学院实验动物中心。2.本实验成功培养小鼠腹腔巨噬细胞，并对培养的原代细胞进行形态学观察和巨噬细胞表面特征性标志CD68分子进行免疫荧光鉴定。3.实验分组为:(1)对照组;(2) AngⅡ组;(3)AngⅡ+SAA12.5μM;(4)AngⅡ+SAA25μM;(5)AngⅡ+SAA50μM。4.噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞活力;黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，硫代巴比妥酸化学比色法(TBA)测定MDA含量;免疫印迹实验(Western blot)测定Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt(308)、p-Akt(473)、NF-κBp65和p-NF-κBp65蛋白的表达;用TUNEL染色法检测巨噬细胞凋亡率。
　　结果：1.原代培养的巨噬细胞24小时后贴壁且生长状态良好;活化和成熟的巨噬细胞表面标志CD68分子的表达阳性率大于99％。2.MTT结果显示与对照组相比，不同浓度的SAA(6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM、200μM)未见明显细胞毒性(P＞0.05)。与对照组相比，AngⅡ能明显抑制巨噬细胞的细胞活力(P≤0.05)而采用SAA预处理后能使巨噬细胞的细胞活力增高(P≤0.05)，并呈浓度依赖性。3.MDA及SOD检测结果显示，与对照组相比，AngⅡ显著增加巨噬细胞MDA的释放、抑制SOD的释放，而采用不同浓度的SAA预处理后可以减少MDA的释放和增加SOD的释放(P≤0.05)，起到抗氧化作用。4.TUNEL染色结果显示，正常培养的巨噬细胞存在一定比例的凋亡细胞，AngⅡ组的细胞凋亡率明显升高（P≤0.05)，而采用SAA(50μM)预处理后能够明显降低细胞凋亡率(P≤0.05)。5.与对照组相比，AngⅡ能够显著增加巨噬细胞促凋亡蛋白Bax的表达(P≤0.05)，降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P≤0.05)，SAA预处理后则能不同程度地减少Bax蛋白的表达(P≤0.05)，增加Bcl-2的表达(P≤0.05)。6.与对照组相比，AngⅡ组巨噬细胞p-Akt和p-NF-κBp65的表达增加(P≤0.05)，不同浓度的SAA预处理能够不同程度地降低巨噬细胞p-Akt和p-NF-κBp65的表达(P≤0.05)。p-Akt在AngⅡ刺激后5min活化水平最高，p-Akt(308)在15min时降低至本底水平，而p-Akt(473)在60min降至本底水平，加入SAA预处理后可使得Akt和NF-κBp65磷酸化水平表达降低。
　　结论：1.SAA能够显著增强被AngⅡ抑制的巨噬细胞活力，并呈浓度依赖性。2.SAA预处理后可以抑制MDA的释放、增加SOD的释放，发挥其抗氧化作用。3.SAA预处理可减少TUNEL染色阳性凋亡细胞数，减少巨噬细胞Bax的表达，增加Bcl-2的表达，发挥其抗细胞凋亡的作用。4.SAA能够使巨噬细胞p-NF-κBp65的蛋白表达水平降低，从而发挥其抗炎作用。5.SAA能够使巨噬细胞p-Akt的蛋白表达水平降低，由此推测其发挥作用有可能是依赖于Akt信号通路而完成的。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

丹参及其水溶性成分与心血管疾病

攻读硕士学位期间发表学术论文题目

临床培训小结

致谢

声明

论文审阅认定书