阿托伐他汀对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用

摘要

目的：采用腹腔注射脂多糖(LPS)方法制备大鼠脓毒症模型，研究阿托伐他汀预处理对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用及其机制。
　　方法：选择清洁级健康雄性SD大鼠90只，随机分为对照组（CON组）、脓毒症组(SEP组)和脓毒症+阿托伐他汀预处理组(ATR组)，每组30只;每组再根据时间点分为0h、2h、6h、12h、24 h，5个亚组，每亚组6只。SEP组和ATR组大鼠腹腔注LPS(5 mg/kg)建立脓毒症大鼠模型，CON组腹腔注射等量生理盐水;ATR组大鼠在造模前5天开始给予阿托伐他汀(20 mg·kg-1·day-1)灌胃，每天1次，连续5天，CON组和SEP组给予等量生理盐水灌胃。各组分别于给药后0h、2h、6h、12h、24 h处死大鼠，开腹取小肠标本，采血。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测血浆二胺氧化酶(DAO)活性、肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)浓度;原位末端转移酶标记技术（TUNEL法）荧光标记肠组织凋亡细胞;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测小肠组织Toll样受体4(TLR4) mRNA相对表达量;小肠组织切片行苏木精-伊红(HE)染色，在光镜下观察小肠组织病理形态学。
　　结果：1、血浆DAO活性0h，三组动物血浆的DAO活性无差异(P＞0.05)，其余各时间点SEP组和ATR组的血浆DAO活性均显著高于CON组，且SEP组高于ATR组(P＜0.05)。不同时间点亚组间的比较:CON组各时间点血浆DAO活性无明显变化(P＞0.05); SPE组血浆DAO活性随时间延长呈上升趋势，各时间点两两比较均有差异(P＜0.05)。在前四个时间点，ATR组血浆DAO活性呈上升趋势(P＜0.05)，但24 h组未再进一步升高，与12h组相比无差异(P＞0.05)。
　　2、血浆I-FABP浓度0h，三组动物血浆的I-FABP浓度比较无差异(P＞0.05)，其余各时间点SEP组和ATR组的血浆I-FABP浓度均显著高于CON组，且SEP组高于ATR组（P＜0.05）。不同时间点亚组间比较:CON组各个时间点I-FABP浓度无明显变化(P＞0.05);SPE组和ATR组血浆I-FABP浓度随时间延长呈上升趋势(P＜0.05)，各时间点两两比较均有差异(P＜0.05)。
　　3、细胞凋亡观察荧光标记肠组织凋亡细胞，0h，各组肠组织未见荧光标记点，在2h、6h、12h、24 h时间点，SEP组和ATR组的荧光标记的肠组织凋亡细胞明显多于CON组，且随着时间增加，凋亡细胞逐渐增多。在同一时间点，SEP组荧光标记的凋亡细胞多于ATR组。
　　4、TLR4 mRNA的相对表达量比较在0h、2h，三组TLR4 mRNA的相对表达量无差异(P＞0.05);在6h，SEP组TLR4 mRNA的相对表达量高于CON组、ATR组(P＜0.05)，ATR组与CON组无差异（P＞0.05）;在12h、24 h，SEP组和ATR组TLR4 mRNA的相对表达量均显著高于CON组，且SEP组高于ATR组(P＜0.05)。不同时间点亚组间的比较:各时间点，CON组TLR4 mRNA的相对表达量无差异(P＞0.05);在0h、2h，SPE组和ATR组TLR4 mRNA的相对表达量无差异(P＞0.05)，6h后，TLR4 mRNA的相对表达量显著升高，且随着时间延长呈上升趋势(P＜0.05)。
　　5、组织病理学CON组小肠黏膜各层结构完整，形态正常，绒毛排列整齐;SEP组肠壁变薄，黏膜明显萎缩，绒毛短缩，上皮坏死脱落，大量中性粒细胞及嗜酸性粒细胞细胞浸润;ATR组肠黏膜组织基本完整，绒毛整齐，但可见轻度萎缩，黏膜水肿不明显，可见炎性细胞浸润，与SEP组相比，小肠黏膜病理损伤明显减轻。
　　结论：脓毒症时，大鼠肠黏膜屏障功能受到损伤，阿托伐他汀预处理可以部分减轻肠黏膜屏障功能损伤，对其有一定保护作用。血浆DAO活性和I-FABP浓度的升高程度与肠黏膜屏障损伤程度一致，能够反映肠黏膜屏障损伤情况。阿托伐他汀能保护肠黏膜屏障功能，可能是通过控制肠黏膜细胞凋亡、减少TLR4mRNA在肠组织表达的机制实现。

目录

研究生个人简介

缩略词表

摘要

前言

材料和方法

1 材料

2 方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述 他汀类药物对脓毒症的保护机制

攻读硕士学位期间发表学术论文

临床培训小结

致谢

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