纳米对比剂G250-mAb-SPIO在体外及荷人肾癌裸鼠模型中的MR靶向成像研究

摘要

目的：评价纳米对比剂G250-mAb-SPIO在G250抗原阳性的人肾癌786-0细胞及荷人肾癌裸鼠模型中的磁共振（magnetic resonance imaging, MRI）靶向成像效果。
　　方法：在1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3-(3-dimethyla-minopropyl) carbodiimide hydrochloride，EDC·HCl]和N-羟基丁二酰亚胺(N-Hyd-roxsuccinimide，NHS)作用下，将肾癌细胞表面特异性G250单克隆抗体(G250-monoclonal antibody, G250-mAb)通过氨基与羧基的缩合反应连接到超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide，SPIO)表面，得到肾癌靶向性磁共振对比剂G250-mAb-SPIO。使用相同方法，用肾癌细胞非特异性单克隆抗体人IgG与SPIO合成非特异性对比剂IgG-SPIO作为对照。分别用G250-mAb-SPIO、IgG-SPIO、SPIO(纳米浓度均为40μg/ml，体积500μl)及培养基在4℃条件下与786-0细胞孵育1h，洗涤消化后将细胞重新分散于明胶溶液中，并置于3.0 T磁共振成像仪中行T2加权成像(T2-weighted imaging, T2 WI)，并测量各组T2值的变化。
　　将786-0细胞注射到裸鼠右前肢腹侧皮下，待移植瘤直径长至8-10 mm时，随机分为2组:对照组（SPIO组）和实验组(G250-mAb-SPIO组)各6只。将SPIO和G250-mAb-SPIO分别以相同的纳米浓度、体积通过裸鼠尾静脉注入裸鼠体内，于注射对比剂前及注射后2h、6h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h置于3.0T磁共振成像仪中行T2WI横轴位扫描。分析各扫描时间点移植瘤T2WI信号强度的变化。注射对比剂72 h后取实验组裸鼠的肝脏、肾脏及肺，做HE染色，观察纳米对比剂对裸鼠实质脏器是否有病理损害;取实验组及对照组肿瘤组织行普鲁士蓝染色，检测瘤体内有无纳米颗粒沉积。
　　结果：体外细胞实验:G250-mAb-SPIO组、IgG-SPIO组、SPIO组及对照组用于MRI T2WI成像的786-0细胞数量差异无统计学意义(P＞0.05)。T2WI图像上，G250-mAb-SPIO组、IgG-SPIO组、SPIO组较对照组T2信号强度减弱，T2值降低，且差异有统计学意义(P＜0.05); G250-MAb-SPIO组较其它组的T2值有明显降低(P＜0.05);IgG-SPIO组与SPIO组间T2值差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　裸鼠模型体内实验:12只荷人肾癌裸鼠模型制备成功。实验组及对照组裸鼠经尾静脉注入对比剂前后，两组组内各时间点肿瘤瘤体T2信号强度差异无统计学意义（P＞0.05）。在同一时间点，两组间裸鼠肿瘤瘤体T2信号强度差异亦无统计学意义(P＞0.05)。实验组裸鼠肝脏、肺及肾脏行HE染色均未见明显异常病理学表现;普鲁士蓝染色检测肿瘤组织内无蓝色颗粒状物质。
　　结论：本研究制备的磁共振纳米对比剂G250-mAb-SPIO对G250抗原阳性肾癌细胞786-0具有良好的靶向识别能力，但本实验条件下该对比剂在荷人肾癌裸鼠模型中尚未实现理想的靶向MR成像效果。

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1 材料

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综述

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