家蚕血淋巴中结合类胡萝卜素的蛋白

摘要

类胡萝卜素作为一种天然着色剂，是家蚕蚕茧的颜色来源。在家蚕血淋巴中对类胡萝卜素转运机理的研究可以为家蚕体内类胡萝卜素转运机制的相关研究提供参考和借鉴，同时也为家蚕生产发育的研究提供线索。
　　本文经过色谱和质谱的分析技术确定家蚕幼虫血淋巴中具有结合类胡萝卜素能力的可能蛋白质。将家蚕幼虫血淋巴依次运用阴离子交换层析、阳离子交换层析及分子筛三步纯化后进行质谱分析，表明家蚕幼虫血淋巴中结合类胡萝卜素的可能蛋白质是载脂蛋白 II/I。同时对三种家蚕品种的血淋巴进行色谱分析，实验发现不同家蚕品种血淋巴中结合类胡萝卜素的可能蛋白质含量的存在差异，家蚕品种Kyp22和4001的血淋巴中结合类胡萝卜素的可能蛋白质相对于家蚕品种P50的血淋巴中的含量较多。
　　色谱层析和质谱层析实验确定了家蚕血淋巴中结合类胡萝卜素的可能蛋白为载脂蛋白II/I，将载脂蛋白II的基因进行分段克隆和原核表达，实验发现分段表达的载脂蛋白II均为可溶性蛋白质，对载脂蛋白II分段原核表达的蛋白质进行色谱层析，发现目的蛋白LP-II-1（Met1-Leu409）结合类胡萝卜素的能力比目的蛋白LP-II-2（Glu300-Tyr687）和LP-II（Met1-Tyr687）结合能力稍强。
　　为了进一步研究家蚕载脂蛋白，通过原核表达系统表达载脂蛋白III其表达量相对较低，为了研究如何提高其表达量，本实验在不同大肠杆菌表达菌株、不同 IPTG诱导浓度和不同诱导温度的条件下研究家蚕载脂蛋白 III的表达情况。结论如下：选择不同大肠杆菌表达菌株，家蚕载脂蛋白III的表达没有明显差异；随着 IPTG诱导浓度的提高，家蚕载脂蛋白 III的表达量也随之增加；诱导温度降低有利于家蚕载脂蛋白III可溶部分的表达，包涵体的表达量相对降低。
　　家蚕血淋巴具有结合类胡萝卜素能力的蛋白为载脂蛋白 II/I，实验结果进一步完善了家蚕体内类胡萝卜素转运机制，为后续实验提供依据。

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缩略表

第1章 绪 论

1.1研究背景

1.2本文研究内容

第2章 家蚕血淋巴中结合类胡萝卜素的蛋白

2.1引言

2.2实验材料与方法

2.3 结果与分析

2.4讨论

2.5本章小结

第3章 载脂蛋白II的表达

3.1引言

3.2实验材料与方法

3.3 结果与分析

3.4讨论

3.5本章小结

第4章 载脂蛋白III的表达与纯化

4.1引言

4.2实验材料与方法

4.3结果与分析

4.4讨论

4.5本章小结

结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文

致谢