加味枇杷清肺胶囊中经方药组的药学研究

摘要

痤疮是发生于毛囊皮脂腺的慢性炎性疾病，发病率高，如果治疗不及时，会对患者的身体和心理造成严重影响。治疗痤疮这种多种因素综合作用的疾病，西医药有一定对症疗效，但一般都具有皮肤刺激性、生殖毒性或耐药性等副作用。中医药治疗痤疮历史悠久，对痤疮辨证分型已相对成熟，分为肺经风热、脾胃湿热等证型。临床应用枇杷清肺饮加减治疗寻常型痤疮疗效确切，但尚未形成一种工艺成熟、使用方便的中药制剂。课题组在经方枇杷清肺饮主清肺经风热基础上，结合现代临床经验适当加味，研制加味枇杷清肺胶囊，供内服治疗寻常型痤疮。本论文承担胶囊中经方药组中间体的研制工作，系统研究了其制备工艺、质量标准及初步药效学，主要内容和结论如下：
　　 ⑴查阅文献资料，根据经方功能主治和方中各味药所含主要化学成分的理化性质，设计提取纯化工艺路线。
　　 以总黄酮、总三萜酸得率为工艺指标，采用单因素及正交试验优选蜜枇杷叶、桑白皮、甘草与党参组提取纯化工艺参数。确定最佳工艺为药材加8倍量70％乙醇回流提取3次，每次2h。提取液合并，浓盐酸调pH为4.0，以0.5倍体积等pH酸水稀释，5000rpm离心，上清液回收乙醇，调pH2.0二次酸沉，5000rpm离心，合并两次的沉淀水洗至无色，置于真空干燥箱内60℃真空干燥得中间体Ⅰ。
　　 以季铵总碱得率为工艺指标，根据单因素试验结果，进行正交试验设计，确定黄连、关黄柏最佳提取工艺为药材加8倍量水回流提取3次，每次1.5h。粗提液加等体积95％乙醇混匀，静置过夜，抽滤，滤液浓缩至无醇味，以蒸馏水定容至一定体积，摇匀作为上样液。通过树脂筛选、动态吸附与正交试验确定最佳纯化工艺为每5.0g(湿重)AB-8树脂处理黄连、关黄柏上样液40mL(0.05g生药/mL、pH为8)，流速0.5mL/min，树脂吸附后以50mL50％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，冷冻干燥24h，得中间体Ⅱ。
　　 ⑵建立了蜜枇杷叶的质量标准，完善了黄连的质量标准。采用薄层色谱法对蜜枇杷叶进行定性鉴别；对其主要成分熊果酸、齐墩果酸与黄连中的盐酸小檗碱含量采用高效液相色谱法测定，暂定蜜枇杷叶中熊果酸含量不低于5.3mg/g，齐墩果酸不低于1.8mg/g，黄连中盐酸小檗碱含量不低于30.0mg/g。
　　 ⑶制定了经方药组中间体的质量标准。对蜜枇杷叶、桑白皮、黄连采用薄层色谱法进行定性鉴别；对中间体主要成分熊果酸、齐墩果酸与盐酸小檗碱含量采用高效液相色谱法测定，暂定中间体Ⅰ中熊果酸含量不低于30.0mg/g、齐墩果酸不低于8.0mg/g，中间体Ⅱ中盐酸小檗碱含量不低于200.0mg/g；初步建立了黄连、关黄柏药材及其中间体的指纹图谱，采用夹角余弦法计算各指纹图谱相似度均大于0.95，确定中间体图谱各指纹峰在药材图谱中均有归属。
　　 ⑷对经方药组中间体进行了初步药效学研究。体外抑菌试验结果表明其对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度为5mg/mL，对痤疮丙酸杆菌为2.5mg/mL，具有较好的抑菌效果；鼠耳肿胀试验表明其具有较好抗炎作用；经方药组中间体也能够显著减小金黄地鼠皮脂腺斑面积。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1.1本论文的研究目的和意义

1.1.1研究目的

1.1.2研究意义

1.2痤疮国内外研究概况

1.2.1中医对痤疮发病机理的认识

1.2.2西医对痤疮发病机理的认识

1.2.3痤疮的治疗及临床用药情况

1.3枇杷清肺饮的文献考证及现代研究进展

1.3.1文献考证

1.3.2现代研究进展

1.3.3处方方解

1.4相关各药的现代研究概况

1.4.1枇杷叶

1.4.2桑白皮

1.4.3黄连

1.4.4关黄柏

1.4.5甘草

1.4.6党参

1.5本论文的研究内容

本章参考文献

第二章经方药组中间体制备工艺研究

2.1药材的鉴定与前处理

2.2指标性成分定量测定方法的建立

2.2.1仪器、试剂与材料

2.2.2总黄酮定量测定方法的建立

2.2.3总三萜酸定量测定方法的建立

2.2.4季铵总碱定量测定方法的建立

2.3蜜枇杷叶、桑白皮、甘草与党参药效成分提取工艺研究

2.3.1仪器、试剂与材料

2.3.2试验方法

2.3.3试验结果

2.4蜜枇杷叶、桑白皮、甘草与党参药效成分纯化工艺研究

2.4.1仪器、试剂与材料

2.4.2试验方法

2.4.3试验结果

2.5黄连、关黄柏药效成分提取工艺研究

2.5.1仪器、试剂与材料

2.5.2试验方法

2.5.3试验结果

2.6黄连、关黄柏药效成分纯化工艺研究

2.6.1仪器、试剂与材料

2.6.2试验方法

2.6.3试验结果

2.7本章小结

本章参考文献

第三章原料药材及经方药组中间体质量标准研究

3.1蜜枇杷叶质量标准研究

3.1.1蜜枇杷叶的薄层鉴别

3.1.2蜜枇杷叶的含量测定

3.1.3蜜枇杷叶质量标准草案

3.2黄连质量标准研究

3.2.1仪器、试剂和材料

3.2.2试验方法

3.2.3试验结果与讨论

3.2.4黄连药材的质量标准草案

3.3其他原料药材的质量标准

3.4蜜枇杷叶、桑白皮、甘草与党参药组中间体质量标准研究

3.4.1定性鉴别

3.4.2定量分析

3.4.3蜜枇杷叶、桑白皮、甘草与党参药组中间体质量标准草案

3.5黄连、关黄柏药组中间体质量标准研究

3.5.1定性鉴别

3.5.2定量分析

3.5.3黄连、关黄柏药组中间体质量标准草案

3.6指纹图谱初步研究

3.6.1黄连、关黄柏指纹图谱研究

3.6.2中间体指纹图谱研究

3.7本章小结

本章参考文献

第四章经方药组中间体主要药效学研究

4.1经方药组中间体体外抑菌作用

4.1.1仪器、试剂与材料

4.1.2试验方法

4.1.3试验结果与讨论

4.2经方药组中间体抗炎试验研究-鼠耳肿胀法

4.2.1试验材料

4.2.2试验方法

4.2.3试验结果与讨论

4.3经方药组中间体对金黄地鼠皮脂腺斑面积的影响

4.3.1试验材料

4.3.2试验方法

4.3.3试验结果

4.4本章小结

本章参考文献

第五章总结及展望

5.1全文总结

5.2工作展望

致 谢

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