减毒活菌卡介苗对支气管哮喘小鼠Toll样受体4表达和细胞因子水平的影响

摘要

目的：通过减毒活菌卡介苗干预支气管哮喘小鼠，观察支气管哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞数量的改变以及病理切片中肺部炎症情况，脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5及IFN-γ细胞因子水平的改变，血清中IgE水平的变化，肺组织Toil样受体4表达的变化，探讨Toil样受体4介导的减毒活菌卡介苗在支气管哮喘免疫治疗中的作用，为减毒活菌卡介苗的作用机制提供依据。 方法：昆明小鼠以卵白蛋白致敏激发建立哮喘模型并小剂量减毒活菌卡介苗接种，最后一次抗原激发24小时内留取所需标本。收集支气管肺泡灌洗液，计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸性粒细胞的数量。肺组织病理切片观察哮喘小鼠肺组织炎症情况及特征性嗜酸性粒细胞。制备脾细胞悬液，ELISA法检测脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5及IFN-细胞因子的含量。左心室采血，ELISA法检测血清中IgE的含量。Western Blotting、免疫组织化学、RT-PCR检测肺组织Toll样受体4的表达。 结果： (1)卡介苗观察组小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞总数与嗜酸粒细胞数量与哮喘组小鼠相比明显减少，肺组织病理切片显示气道炎症明显减轻。 (2)ELISA法检测发现，卡介苗观察组小鼠脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5水平与哮喘组小鼠相比显著降低，IFN-γ水平显著上调，血清中IgE的水平显著降低。 (3)Western Blotting、免疫组织化学以及RT-PCR技术检测发现，卡介苗观察组小鼠Toll样受体4表达量与哮喘组相比相对增强，与空白对照组相比显著增强。 结论：减毒活菌卡介苗干预支气管哮喘小鼠，通过上调Toil样受体4的表达，启动了Toll样受体4的免疫调节机制，从而引起机体的Th1型免疫反应，脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5水平显著降低，IFN-γ水平显著上调，其中IFN-γ是Th1型细胞因子，IL-4和IL-5是Th2型细胞因子，纠正了哮喘Th1/Th2失衡，减轻哮喘炎症，小鼠支气管肺泡灌洗液中细胞总数与嗜酸性粒细胞数减少，肺组织病理切片同时也表明哮喘小鼠气道炎症有明显减轻。实验证实，Toil样受体4参与支气管哮喘的治疗，Toil样受体4介导了减毒活菌卡介苗对支气管哮喘的免疫治疗作用。

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文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写索引

声明

第一章绪论

1.1支气管哮喘疾病概况

1.2支气管哮喘的发病机制

1.2.1免疫学机制

1.2.2气道高反应性(airway hyperresponsiveness，AHR)

1.2.3气道炎症

1.2.4神经机制

1.3卡介苗对支气管哮喘的免疫治疗

1.3.1对巨噬细胞的调节作用

1.3.2增强抗原的免疫原性

1.3.3对肥大细胞的膜稳定作用

1.3.4对淋巴细胞的调节作用

1.3.5对Toll样受体4的调节

1.4本论文研究的目的、方法、实验方案的设计和意义

第二章减毒活菌卡介苗对支气管哮喘气道炎症的影响

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2方法

2.2结果

2.2.1哮喘小鼠的一般性特征

2.2.2支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸性粒细胞数量的变化

2.2.3肺组织病理切片HE染色结果

2.3讨论和小结

第三章减毒活菌卡介苗对支气管哮喘细胞因子及血清IgE的影响

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2方法

3.2结果

3.3讨论和小结

第四章减毒活菌卡介苗对支气管哮喘Toll样受体4表达的影响

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2方法

4.2结果

4.2.1肺组织中TLR4蛋白表达的Western Blotting鉴定

4.2.2肺组织中TLR4表达的免疫组化分析

4.2.3肺组织中TLR4基因表达的RT-PCR鉴定

4.3讨论和小结

主要结论和展望

参考文献

致谢

第八章 攻读硕士期间发表的文章