亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性对癌基因C-erbB-2 CpG岛甲基化状态的影响及其与肿瘤的关系

摘要

目的：研究肿瘤及其相对应的癌旁组织中C—erbB-2基因启动子区域CpG岛的甲基化状态、癌蛋白C—erbB-2表达水平以及肿瘤组织中C—erbB-2基因甲基化状态对癌蛋白表达水平的影响；探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性对肿瘤组织C—erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化的影响及其与肿瘤的关系。 方法：用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)分析经病理证实的247例肿瘤及其肿瘤旁组织中C—erbB-2基因启动子区域CpG岛的甲基化状态，用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性法(PCR—RFLP)检测247例肿瘤患者及100例正常对照中MTHFR基因C677T多态性，并用免疫组织化学法(IHC)检测43例结直肠癌及癌旁组织中C—erbB-2蛋白的表达。 结果：在研究的所有肿瘤中，癌组织中的C—erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化率明显低于癌旁组织(43.3％vs．69.2％，P=0.000)，但未发现癌组织中C—erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理参数间的关联。肿瘤患者中MTHFR基因677位点T等位基因频率显著高于正常对照组，677CT/TT基因型显著增加了肿瘤的风险(OR=1.619，95％CI：1.012-2.588，P=0.043)。肿瘤患者中，CT/TT基因型个体肿瘤组织中C—erbB-2甲基化率低于CC基因型个体(39.4％vs．50.0％)，但差异不具有统计学意义(P=0.103)；在肿瘤组织发生C—erbB-2甲基化与未甲基化的个体间C、T等位基因的分布差异也不具有显著性意义(P=0.078)。在乳腺癌C—erbB-2启动子区CpG岛发生甲基化的个体中CC基因型和C等位基因的频率显著高于未发生甲基化的个体(P值分别为0.008和0.007)。 所检测的43例结直肠癌组织和癌旁组织中，癌蛋白C—erbB-2过度表达率分别为67.4％和27.9％，差异具有统计学意义(P=0.000)。C—erbB-2癌蛋白表达水平与肿瘤分期相关(P=0.010)，与年龄(P=0.586)、性别(P=0.739)、肿瘤部位(P=0.05)、组织学分级(P=0.815)、淋巴结转移(P=0.594)等参数均无明显相关。结直肠癌组织中C—erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态与癌蛋白表达水平相关(P=0.03，r=0.331)。 结论：在癌组织中C—erbB-2基因启动子区CpG岛呈低甲基化状态，MTHFR基因677CT/TT基因型显著增加了肿瘤的风险；在乳腺癌中，MTHFR基因C677T多态性对C—erbB-2基因启动子区CpG岛的甲基化有明显影响。 C—erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能是结直肠癌组织C—erbB-2癌蛋白过度表达的重要因素之一，有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写中英文对照表

声明

第一章引言

第二章肿瘤患者癌组织及癌旁组织中C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态分析

2.1实验材料

2.1.1研究对象

2.1.2主要试剂

2.1.3主要仪器

2.2实验方法

2.2.1 DNA的提取

2.2.2 DNA的修饰

2.2.3甲基化阳性对照的处理

2.2.4引物的设计与合成

2.2.5 C-erbB一2基因启动子区CpG岛甲基化状态分析

2.3实验结果

2.4讨论

第三章 肿瘤患者、正常对照中MTHFR C677T多态性分析及与肿瘤、C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化的关系

3.1实验材料

3.1.1研究对象

3.1.2主要试剂

3.1.3主要仪器

3.2实验方法

3.2.1正常对照组外周血DNA的提取

3.2.2 MTHFR C677T引物合成

3.2.3 MTHFR C677T多态性分析

3.3实验结果

3.4讨论

第四章结直肠肿瘤患者癌组织及癌旁组织中C-efbB-2蛋白表达分析及其与C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化的关系

4.1实验材料

4.1.1研究对象

4.1.2主要试剂

4.1.3主要仪器

4.2实验方法:免疫组织化学法

4.3实验结果

4.4讨论

第五章总结

参考文献

致谢

附录A 综述　表观遗传修饰、DNA甲基化与肿瘤

附录B 在读期间发表论文