Clodronate脂质体对急性坏死性胰腺炎大鼠Kupffer细胞凋亡的作用

摘要

目的:急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)病情凶险,病程发展快,病死率高,其病程中常出现全身性炎症反应综合征、严重感染、感染性休克及多器官功能障碍综合征(multipieorgan dysfunction syndrome,MODS),导致死亡。近年来随着对其发病机制研究的不断深入,发现巨噬细胞在ANP中起重要的作用。本研究旨在探讨氯膦酸二钠脂质体(liposomal clodronate,LC)对ANP大鼠枯否细胞(Kupffer cell,KC)凋亡的作用。
　　 方法:采用薄膜法制备LC；经大鼠胰腺被膜下均匀注射5％牛磺胆酸钠4ml/kg制作ANP模型,分离培养ANP大鼠Kupffer细胞,加入不同体积的Clodronate旨质体(50μl、100μl、150μl)进行干预,然后分别采用MTT法,流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测KC增殖、凋亡情况。
　　 结果:所制备的脂质体直径100-200nm,Clodronate包裹率为(5.8％),透射电镜检查见其大小均匀。获得的KC形态正常,经瑞氏染色法鉴定纯度>90％,台盼蓝染色,细胞存活率>95％。在三种不同体积的LC干预24小时后,KC的抑制率分别为17.4％,24.2％和31.1％:流式细胞术检测发现,在三种不同体积LC干预下,KC凋亡率分别为(14.12±0.37)％,(18.74±0.43)％和(27.51±0.39)％,差异均有显著性(P<0.01)；经1.2％琼脂糖凝胶电泳显示,随着Clodronate脂质体体积的增加,KC的DNA出现降解,逐渐呈现渐清晰的特征性梯状条带。
　　 结论:利用薄膜法制备LC操作简单,方法易于掌握,我们在实验中成功制备出了LC,通过透射电镜发现其大小均匀。在本实验中,我们发现,LC对ANP大鼠KC生长具有明显抑制作用,并可诱导其凋亡。本实验为ANP的临床治疗提供了新的理论依据。