红花中两种红花黄色素的提取分离及其组合冻干粉针剂的初步研究

摘要

红花为菊科一年生草本植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花，具有活血通经、祛瘀止痛的功效，是传统的活血化瘀类中药，花中所富含的黄色素(SY)类成分是主要的活性部位，羟基红花黄色素A(HSYA)和红花黄色素A(SYA)又是SY中的主要组成部分。本课题针对SY热不稳定的特点，以新疆霍城产的红花为研究对象，提取、分离、纯化了HSYA和SYA，并采用低温干燥技术对其进行了粉针剂的研究，为红花资源的开发利用奠定了基础。
　　 本文首先以市售红花注射液为对照，利用高效液相色谱(HPLC)技术对复杂样品的高分离能力对红花药材水提液加热前后的成分变化进行了研究分析，揭示了SY家族的组成情况及其热不稳定性变化规律，提示红花中HSYA和SYA两种成分纯化以及低温冻干工艺研究的必要性。
　　 本文在提取工艺研究方面，考察了红花中两种SY成分的提取、纯化方法。以水为提取溶媒进行提取，大孔吸附树脂技术进行富集，反相C18柱和sephadex LH-20凝胶柱分离、纯化；在提取、纯化过程中采用聚酰胺薄膜和HPLC指纹图谱技术跟踪检测，优化了提取、纯化工艺，并结合光谱技术对纯品进行了结构确证。
　　 为配合两种SY的提取，本文建立了HPLC同步测定了红花药材中HSYA与SYA的含量方法。采用Akasil C18(4.6 mm×250mm，5μm)色谱柱，以乙腈(A)-0.4％磷酸(B)为流动相，梯度洗脱(0～30 min，10％A；30～50min,15％A；50～55min,25％A；55～60min,10％A),流速0.7mL·min-1，检测波长403nm，柱温30℃。结果：HSYA、SYA进样量的线性范围分别为0.451～1.05μg(r=0.9993)和0.278～0.650μg（r＝0.9996）(μ=5)；平均加样回收率（n=6）分别为100.6％和103.0％。本方法快速、灵敏，重复性好。
　　 本文在剂型研究方面，采用低温冻干技术对HSYA和SYA组合物的粉针剂进行了初步研究。通过正交试验方法确定了冻干粉针剂的配方为：HSYA10g，SYA6g，甘露醇20g，EDTA-2Na6.4(0.04％)，调节pH为6.O；用0.05％活性炭脱色，加注射用水至2000mL(2mL/瓶)；考察了初步稳定性；确定了分析方法。
　　 本文在药效研究方面，对HSYA和SYA的抗凝血及抗血小板聚集作用进行了初步考察。以PH=7.4的生理盐水为阴性对照，肝素钠为阳性对照，采用体外实验的方法对两者抗凝血及抗血小板聚集作用进行检测。结果两者对APTT、TT、PT都有抑制作用，同时具有抗血小板聚集作用。且SYA的抗血小板聚集作用比HSYA的作用强。

目录

文摘

英文文摘

第一章 绪论

1 红花的研究背景及研究进展

1.1 红花的化学成分

1.2 红花黄色素提取方法

1.3 红花黄色素的药理作用

1.4 红花的质量标准

1.5 红花的剂型

1.6 红花的药代动力学特征

1.7 红花黄色素的稳定性

1.8 中药注射剂的现状

1.9 中药的冻干粉针

2 本课题的立题意义和主要研究内容

2.1 立题意义

2.2 主要研究内容

参考文献

第二章 高效液相色谱法对红花注射液中热不稳定成分的研究

1 仪器、试剂与材料

1.1 仪器

1.2 试剂与材料

2 实验方法

2.1 色谱条件

2.2 对照品溶液的制备

2.3 供试品溶液的制备

2.4 样品检测

3 实验结果

4 讨论

参考文献

第三章 红花黄色素提取工艺研究

1 仪器、试剂与材料

1.1 仪器

1.2 试剂与材料

2 实验方法

2.1 红花药材中红花黄色素含量测定方法研究

2.2 SY提取工艺的研究

2.3 红花黄色素渗漉工艺的优化

2.4 渗漉液浓缩温度和浓缩时问的考察

3 实验结果

3.1 红花中红花黄色素含量测定结果

3.2 红花黄色素提取工艺的研究结果

3.3 红花黄色素渗漉工艺的优化结果

3.4 渗漉液浓缩温度和浓缩时间的考察结果

3.5 最优提取工艺验证

参考文献

第四章 羟基红花黄色素A与红花黄色素A的分离、纯化工艺研究

1 仪器、试剂与材料

1.1 仪器

1.2 试剂与材料

2 红花药材中HSYA与SYA的含量测定方法

2.1 实验方法

2.2 实验结果

3 红花药材中HSYA与SYA的分离、纯化工艺

3.1 实验方法

3.2 实验结果

4 讨论

参考文献

第五章 羟基红花黄色素A与红花黄色素A的组合冻干粉针剂研究

1 仪器、试剂与材料

1.1 仪器

1.2 试剂与材料

2 制剂工艺研究

2.1 实验方法

2.2 实验结果

3 质量标准初步研究

3.1 实验方法

3.2 实验结果

3.3 有关物质检查

4 初步稳定性考察

4.1 实验方法

4.2 实验结果

5 配伍稳定性试验考察

5.1 实验方法

5.2 实验结果

6 讨论

参考文献

第六章 羟基红花黄色素A和红花黄色素A药理活性比较试验

1 仪器、试剂与材料

1.1 仪器

1.2 试剂与材料

2 实验方法

2.1 血浆的制备

2.2 供试品的制备

2.3 抗血小板聚集率的测定

2.4 活化部分凝血活酶时间(APTT)的测定

2.5 凝血酶时间(TT)的测定

2.6 凝血酶原时间(PT)的测定

2.7 统计学分析

3 实验结果

3.1 抗血小板聚集的测定

3.2 活化部分凝血活酶时间(APTT)的测定

3.3 凝血酶时间(TT)的测定

3.4 凝血酶原时间(PT)的测定

4 讨论

参考文献

第七章 总结与展望

1 全文总结

2 工作不足之处与展望

致谢

硕士学位在读期间发表的文章