CD44变异体(CD44V17)在食管癌及胃癌中的表达及其与多药耐药相关性的研究

摘要

目的：1．通过对一种新的CD44变异体(CD44v17)基因表达量的检测，了解其在食管及胃癌组织中的表达情况，探讨其表达与食管癌肿瘤大小、发生部位、病理类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移，胃癌的肿瘤大小、组织学分类、浸润深度、有无淋巴结转移、有无肝脏转移的关系。2．通过对CD44v17和MDR1基因表达量的检测，了解CD44v17和MDR．1基因在食管及胃癌组织中表达水平的相关性及其临床意义。
　　 方法：1．从MCF—7/Adr细胞中提取总RNA进行RT—PCR，获得全长cDNA模板，根据本实验室在MCF—7/Adr中新发现的一种CD44剪切拼接变异体CD44v17(Gene Bank NO．FJ216964)和MDR1基因设计特异性荧光定量PCR引物，从而获得CD44 v17和MDR1基因产物，PCR产物于2％琼脂糖凝胶电泳后切胶回收，并参照胶回收试剂盒说明书对PCR产物进行回收，纯化。2．将PCR纯化产物连接于pMD19—T simplevector上，TA克隆后，提取质粒并测定含量及进行双酶切反应验证，将阳性质粒进行DNA测序。3．将含有目的基因的阳性质粒用EppendofBio—photometer测定浓度，按公式：C×10—8/(R+3000)×3．415×6．02×1023(copies/μl)计算质粒拷贝数，稀释成108～1045个梯度浓度的标准品。4．应用SYBR GreenⅠ荧光染料，采用real time PCR法检测73例食管癌及87例胃癌组织及相应癌旁组织CD44v17 mRNA、MDR1 mRNA的表达，根据标准曲线计算出CD44v17 mRNA、MDR1 mRNA的表达量，分析CD44v17的表达与食管及胃癌临床参数的关系，并探讨其与MDR1基因表达的相关性。
　　 结果：1．食管癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0．05)；食管癌CD44v17 mRNA表达与肿瘤的大小，发生部位，病理类型均无相关性(P>0．05)；而与食管癌的分化程度，临床TNM分期，淋巴结转移相关(P<0．05)。2．胃癌组织CD44v17 mRNA表达明显高于相应癌旁正常组织(P<0．05)；胃癌肿瘤>5cm组CD44v17mRNA表达与胃癌肿瘤≤5cm组表达无统计学意义(P>0．05)；未分化腺癌组CD44v17 mRNA表达明显高于乳头状腺癌及管状腺癌组(P<0．05)，乳头状腺癌组CD44v17 mRNA表达与管状腺癌组无统计学意义(P>0．05)；肿瘤累及浆膜及浆膜外组CD44v17 mRNA表达显著高于侵及粘膜、粘膜下层及肌层组(P<0．05)，而肿瘤侵及粘膜及粘膜下层组的CD44v17 mRNA表达与侵犯肌层组表达无统计学意义(P>0．05)。淋巴结转移组CD44v17 mRNA表达明显高于淋巴结无转移组(P<0．05)；有肝脏转移组CD44v17 mRNA表达显著高于无肝脏转移组(P<0．05)。3．食管癌组织中MDR1 mRNA表达为2．96±1．27，相应癌旁组织的表达为1．87±0．87，食管癌组织的MDR1 mRNA表达明显高于相应癌旁组织(P<0．01)。胃癌组织中MDR1 mRNA表达为2．88±1．32，相应癌旁组织的表达为1．98±0．91，胃癌组织的MDR1mRNA表达明显高于相应癌旁组织(P<0．01)。4．在食管癌组织中CD44v17与MDR1基因的表达呈正相关(r=0．8276，P<0．01)；在胃癌组织中CD44v17与MDR1基因的表达呈正相关(r=0．8322，P<0．01)。
　　 结论：1．CD44v17 mRNA在食管及胃癌组织中高表达，可能与食管及胃癌的侵袭、转移及预后有关。2．在食管及胃癌中CD44v17的表达与MDR1的表达密切相关，两者同时高表达提示患者预后不良。

目录

文摘

英文文摘

绪论

1.1 食管癌的分子生物学研究进展

1.2 胃癌的分子生物学研究进展

1.3 粘附分子CD44的研究进展

1.3.1 CD44基因的定位与结构

1.3.2 CD44基因的结构域的特征

1.3.3 CD44生理功能

1.3.4 CD44分子在肿瘤中的表达

1.4 CD44v17基因结构

1.5 肿瘤多药耐药的研究进展

1.6 MDR1/P-GP介导的多药耐药

1.7 CD44与肿瘤的多药耐药

1.8 本课题的着眼点和主要的研究思路

第一部分 食管癌组织中CD44V17的表达及临床意义的探讨

2.1 材料与方法

2.1.1 材料

2.1.2 方法

2.2 结果

2.2.1 重组质粒PMD19T-CD44V17的酶切鉴定结果

2.2.2 qRT-PCR检测CD44v17 mRNA的标准曲线、扩增曲线和融解曲线

2.2.3 qRT-PCR检测食管癌组织与相应癌旁组织CD44v17 tuRNA的表达量

2.2.4 CD44V17 mRNA的表达与食管癌生物学特性的关系

2.3 讨论

2.4 本章小结

第二部分 食管癌中CD44V17与MDR1基因表达的相关性

3.1 材料与方法

3.1.1 材料

3.1.2 方法

3.2 结果

3.2.1 重组质粒PMD19T-CD44V17、PMD19T-mdr1的酶切鉴定结果

3.2.2 qRT-PCR检测CD44v17 mRNA、mdr1 mRNA的标准曲线、扩增曲线和融解曲线

3.2.3 食管癌组织与相应癌旁组织MDR1的表达量

3.2.4 食管癌组CD44v17与mdr1相关性分析

3.3 讨论

3.4 本章小结

第三部分 胃癌组织中CD44V17的表达及临床意义的探讨

4.1 材料与方法

4.1.1 材料

4.1.2 方法

4.2 结果

4.2.1 重组质粒PMD19T-CD44V17的酶切鉴定结果

4.2.2 qRT-PCR检测CD44v17 mRNA的标准曲线、扩增曲线和融解曲线

4.2.4 qRT-PCR检测胃癌组织与相应癌旁组织CD44v17 mRNA的表达量

4.2.5 CD44V17 mRNA的表达与胃癌生物学特性的关系

4.3 讨论

4.4 本章小结

第四部分 胃癌中CD44V17与MDR1基因表达的相关性

5.1 材料与方法

5.1.1 材料

5.1.2 方法

5.2 结果

5.2.1 重组质粒PMD19T-CD44V17、PMD19T-mdr1的酶切鉴定结果

5.2.2 qRT-PCR检测CD44v17 mRNA、mdr1 mRNA的标准曲线、扩增曲线和融解曲线

5.2.3 胃癌组织与相应癌旁组织MDR1的表达量

5.2.4 胃癌组CD44v17与mdr1相关性分析

5.3 讨论

5.4 本章小结

主要结论与展望

6.1 主要结论

6.2 展望

参考文献

英文缩写索引

致谢

攻读硕士期间发表文章