麦胚凝集素化修饰昔萘酸沙美特罗纳米粒-微粒干粉末吸入给药系统的研究

摘要

本文旨在构建一种基于凝集素化纳米粒载体的干粉吸入肺部时辰给药系统，将可能为哮喘的时辰药物防治新方案提供技术基础。以昔萘酸沙美特罗(SalX)为模型药物，壳聚糖(CS)为载体材料，麦胚凝集素(WGA)为修饰材料，通过离子交联法联合喷雾干燥工艺制得WGA化修饰的SalX纳米粒-微粒(WGA-SalX-NiMS)系统。
　　 第一章采用离子交联法制备得到壳聚糖纳米粒(CS-NPs)，在戊二醛活化的条件下，用WGA对CS-NPs进行修饰，并分别考察了戊二醛用量和WGA用量对二者结合率的影响。以BSM作为凝集素的特异性结合底物，WGA-CS-NPs同BSM的结合率高于未修饰的普通CS-NPs，说明WGA的凝集素结合活性。WGA同BSM的结合作用可以被NAG竞争抑制，反映出WGA-CS-NPs上锚合的凝集素活性保持及其对NAG结合的专一性。
　　 第二章成功建立了SalX体外分析方法，该方法线性范围较广，精密度和回收率均符合测定要求。通过喷雾干燥工艺成功制得三种NiMS粉末(空白NiMS;SalX-NiMS;WGA-SalX-NiMS)，粉末得率均在65％以上。对NiMS粉末的粉体性质进行考察，结果表明，NiMS粉末外观较为圆整规则，粒径分布多集中在2～8μm范围内，包封率在70％以上，载药量为8％。体外释放结果表明，经WGA化修饰后药物释放明显减慢(P＜0.05)，证明WGA化修饰对纳米粒载体降解的抑制效应;在释放介质中加入NAG后，WGA-SalX-NiMS粉末体外释药速度明显加快(P＜0.05)，并且随着NAG浓度的增加而进一步加快，而即使是最大浓度的NAG，其对SalX-NiMS体外释药速度仍无显著影响，表明了NAG对凝集素WAG修饰微粒释药的促进作用。本实验制备得到的两种处方粉末(SalX-NiMS;WGA-SalX-NiMS)二级沉积百分比均在20％左右，可呼吸比例较高。
　　 第三章用MTT法考察细胞毒性，结果表明随着纳米粒溶液浓度的增加，A549细胞存活率降低。分别用荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜观察细胞摄取过程，结果表明随着时间的延长，纳米粒被A549细胞摄取的越来越多，纳米粒经A549细胞摄取后主要分布在胞浆，WGA修饰可能有助于A549细胞对纳米粒的摄取。
　　 第四章进行了WGA-SalX-SalX干粉吸入药效学试验，结果表明小鼠气道连续喷入粉末27天，与模型组相比白细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞有下降的趋势，但无统计学差异。SalX-NiMS组和WGA-SalX-NiMS组小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞均无显著性差异。
　　 第五章成功建立了SalX在小鼠体内的含量测定分析方法，该法线性范围较广，专一性、精密度、准确度、提取回收率以及样品处理后放置稳定性均符合测定要求。小鼠血浆和肺组织药物浓度测定结果表明WGA-SalX-NiMS粉末血药浓度均普遍高于SalX-NiMS(P＜0.05)，这表明WGA修饰后的SalX-NiMS在小鼠体内易于释药，血浆和肺组织中药物浓度较高，有利于哮喘发作时炎症的控制与改善。